pTXB1 载体 货 号 #N6707S-NEB酶试剂

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产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 :大肠杆菌

pTXB1 载体                              收藏

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#N6707S
10 μg
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相关产品

IMPACT™ 试剂盒
pTXB1 载体
pTYB21 载体
几丁质树脂
抗 CBD 单克隆抗体

特性

 单柱纯化且无需使用蛋白酶
 目的蛋白质不含来自载体的氨基酸
 可融合到目的蛋白的 N 端或 C 端
 重组蛋白的连接或标记
 可分离有或无 N 端甲硫氨酸的蛋白 

关于产品详细描述和 pTXB1 和 pTYB21 载体图谱,包括 MCS(多克隆酶切位点),请见目录 355-356 页。载体序列文件请联系我们。 www.neb-china.com,www.neb.com 查询。
 

概述

IMPACT(Intein Mediated Purificaiton with an Affinity Chitin-binding Tag)试剂盒利用经改良过的蛋白剪接元件(内含肽)进行一步亲和纯化重组蛋白(图1)。该系统与其它蛋白融合表达系统的主要区别在于:无需蛋白酶作用,即可将重组蛋白与其亲和标签(Tag)分离。

IMPACT 试剂盒能够融合表达含有内含肽及几丁质结合结构域(CBD)的蛋白,融合标签可以融合到目标蛋白的 C 端(pTXB1)或 N 端(pTYB21)(图 2)。在硫醇试剂(如 DTT)的参与下,内含肽进行特异性的自我剪切,释放出目的蛋白。pTXB1 载体还可用于表达和纯化 C 端含硫脂键的蛋白,并用于内含肽介导的蛋白连接(IPL,图 3)。IPL 反应,即表达蛋白连接,可通过一种天然肽键将 N 端为半胱氨酸的多肽或蛋白和一段细菌表达出的 C 端硫脂键蛋白连接起来,此反应可用于蛋白标记或半合成。有关 IMPACT 系统和 IPL 的更多信息请联系我们。 www.neb-china.com,www.neb.com 查询。

pTYB21 的内含肽标签包含酿酒酵母(Sce)VMA1 内含肽和几丁质结合域融合在目的蛋白的 N 末端。

pTXB1 是大肠杆菌表达载体,携带有一个小的蛋白自剪切元件即来自 Mycobacterium xenopi gyrA 基因的 mini 内含肽[Mxe GyrA 内含肽,22 kDa]。蛋白自剪切元件经修饰后与来自芽孢杆菌(Bacillus circulans)的几丁质结合域(CBD)一起共同形成一个内含肽标签。该标签可与几丁质珠(NEB #S6651)结合。使用硫醇试剂(如 DTT)或 MESNA(2-mercaptoethanesulfonic acid)(后续连接用)诱导内含肽自我剪切并释放出目的蛋白。

pTXB1 载体            货   号                  #N6707S 
图 1:单柱亲和纯化麦芽糖结合蛋白。泳道 1:未诱导细胞提取物。泳道 2:诱导表达融合蛋白细胞提取物。泳道 3:4℃ 过夜诱导裂解得到麦芽糖结合蛋白。泳道 4:麦芽糖结合蛋白偶联到含有 N 端半胱氨酸的肽链上。Marker M:蛋白分子量标准(NEB #P7703)。

pTXB1 载体            货   号                  #N6707S
图 2:IMPACT 系统流程图

pTXB1 载体            货   号                  #N6707S
图 3:内含肽介导的蛋白连接(IPL)流程图。

表 1:IMPACT 载体及其应用。

pTXB1 载体            货   号                  #N6707S
a实际切割效率取决于临近的残基和融合蛋白的折叠。DTT 仅用于蛋白纯化。MESNA 可以使分离的蛋白拥有一个 C-末端的巯酯键,可用于连接、标记和环化。c 半胱氨酸可用来替代 DTT。

iMPACT 试剂盒组成

– 大肠杆菌表达载体:pTXB1、pTYB21 和 pMXB10 对照载体
– 几丁质珠:纯化融合蛋白的亲和基质(结合容量 = 2 mg/ml)
– 抗 CBD 单克隆抗体
– DTT 与 SDS 上样缓冲液   

参考文献

关于本产品特点与应用的参考文献请联系我们。