K. lactis GG799 感受态细胞 货 号 #C1001S-NEB酶试剂

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产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 :酵母

K. lactis GG799 感受态细胞                              收藏

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#C1001S
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K. lactis 蛋白表达试剂盒 
SacII(星选酶)
K. lactis GG799 感受态细胞
酵母碳基础培养基

特性

 可克隆和表达对大肠杆菌有毒性的基因
 可同时表达多个基因
 无需昂贵的抗生素或甲醇
 易操作的实验步骤,适用于无酵母表达经验者
 有吸引力的商业授权 

pKLAC2 载体限制性酶切图谱请参见 351 页,序列信息请联系我们。 www.neb-china.com,www.neb.com 查询。  

概述

K. lactis 蛋白表达试剂盒提供了一种在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)中表达目的基因的简便方法。目的基因克隆到 pKLAC 系列整合载体中,既可表达胞内蛋白,亦可表达分泌型蛋白。与其它酵母和细菌表达系统相比,K. lactis 蛋白表达系统有着诸多优点。首先,乳酸克鲁维酵母具有高培养密度及整合多拷贝质粒的能力,使其可成功制备大量的高表达蛋白质;其次,pKLAC1 系列载体使用强 LAC4 启动子,该启动子经修饰,在大肠杆菌中无背景表达,因此,可用于对大肠杆菌有毒性的基因表达;再有,试剂盒提供高效转化的 K. lactis 感受态细胞,使得该系统适用于需要大量转化子的实验,比如利用 cDNA 文库进行表达克隆;另外,酵母转化子的筛选不需要昂贵的抗生素,培养基中也不需要甲醇;最后,K. lactis 细胞表达的蛋白质可以进行翻译后修饰,因而可成为细菌表达系统的有用替代。

pKLAC2 属于通用表达载体。利用这些载体既可使重组蛋白在细胞内表达,也能通过与 K. lactis α-factor 的融合实现分泌表达。pKLAC2 的多克隆位点与 NEB 其它表达系统相兼容。

GG799 是 K. lactis 蛋白表达试剂盒中提供的基础菌株。其特点是细胞生长密度与异源蛋白表达效率极高,GG799 细胞未经遗传修饰。

K. lactis GG799 感受态细胞            货   号                  #C1001S 
蛋白质的分泌过程。在细胞核中,整合表达载体编码了一个含有 ɑ-MF 结构域(蓝色)和目的蛋白(黑色)的融合蛋白。融合蛋白表达后,位于 ɑ-MF 上的信号肽就会指导融合蛋白转运至内质网(ER),信号肽即被信号肽酶(SP)切除。融合蛋白质转运至高尔基体,Kex 蛋白酶在此将 α-MF 结构域切除。随后,目的蛋白质被分泌到细胞外。

K. lactis GG799 感受态细胞            货   号                  #C1001S
K. lactis 的蛋白表达。SDS-PAGE 电泳分离检测分泌性表达的重组麦芽糖结合蛋白(MBP),菌体生长在富含蛋白胨(peptone)的培养基中,直接上样检测。考马斯亮蓝染色鉴定。泳道 1:蛋白分子量 Marker;泳道 2:野生型 K. lactis 细胞培养液(15 μl);泳道 3:整合有大肠杆菌 malE 基因表达框的 K. lactis 细胞培养液(15 μl)。

K. lactis 蛋白表达试剂盒包括

– pKLAC2 载体和 pKLAC1-malE 对照质粒
– SacII
– 整合测序引物套装
– K. lactis GG799 感受态细胞和转化试剂
– 酵母碳基础培养基与乙酰胺溶液   

参考文献

关于这些产品特点与应用的参考文献请联系我们。