上海金畔生物科技有限公司供应RIPA裂解液(中) Jinpan P0904量大优惠，咨询 ：

 RIPA裂解液（中） Jinpan P0904

上海金畔生物科技有限公司供应RIPA裂解液（中） Jinpan P0904量大优惠，咨询 ：      2743691513

1、 品简介：

2、     我们生产的RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
    RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。关于不同的RIPA裂解液以及我们生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考附录。
    RIPA裂解液（中）的主要成分为50mM Tris（pH 7.4），150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。
    用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
包装清单：

3、 保存条件：
    -20℃保存，一年有效。
注意事项：
    为取得*的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
    裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
    关于裂解液的选择，一方面可以参考我们生产的各种裂解液主要特点、差异，选择合适的裂解液；另一方面也需要通过一些预实验来摸索*的适合您实验条件的裂解液。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4、 使用说明：
对于培养细胞样品：
1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zui终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗）。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
   对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
   裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zui终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组
DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NFκB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。