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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/文库定量
货 号
规 格
价 格(元)
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#E7630L
500 次反应
5,199.00
无
无
无
无
无
#E7630S
100 次反应
1,219.00
无
无
无
无
无
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产品特性
提供更精准可靠的定量结果
适用于不同方法制备的多种插入片段大小及 GC 含量的文库
只需要 4 个标准样品，每个试剂盒可定量的文库更多
提供使用方便的文库稀释缓冲液
NEBNext 文库定量预混液只需要加入引物
无论插入片段大小，所有的文库均可使用同一延伸时间
文库定量结果可以通过 NEB 线上工具 NEBioCalculator.neb.com 轻松计算
试剂盒中包含 ROX，方便需要参照染料的 qPCR 仪器进行标准化
概述
二代测序文库的精确定量对于每次测序得 到 的 数 据 量 及 数 据 的 质 量 至 关 重 要 。 特 别是 Illumina 平台，精确的文库定量对于优化簇密度，从而得到最好的测序结果非常重要。实时定量 PCR（qPCR） 是最精确及有效的文库定量方法，与测量总核苷酸浓度的电泳法和分光光度计法相比，qPCR 有更高的一致性和重复性。基于扩增的定量方法只测量包含两个接头序列的分子，从而提供更为精准的可测序文库分子的浓度。
NEBNext 文库定量试剂盒对二代测序中基于 qPCR 的文库定量提供了显着的提升。NEBNext 文库定量试剂盒优化了针对 Illumina 平台基于 qPCR 定量组分。NEBNext 文库定量试剂盒包含 P5 和 P7 Illumina 接头序列的引物，以及一组高质量预稀释的 DNA 标准品，对 150-1000 bp 之间稀释的 DNA 文库进行可靠的定量。
图 1. 使用 NEBNext 文库定量试剂盒定量文库大小浓度，实现最佳簇密度。
使用 NEBNext，可以从具有广泛的文库大小 和 GC 含量的量化文库获得最佳簇密度。 使用 NEBNext 文库定量试剂盒定量来自指定来源的 310-963bp 的文库，然后稀释至8pM 并加载到 MiSeq（v2 化学; MCS v2.4.1.3） 上。文库浓度范围为 7-120 nM，文库的原始簇密度为 965-1300 k / mm 2（ave。= 1199）。
图 2. 使用 NEBNext 文库定量试剂盒，文库定量结果一致性更好。
文库定量试剂盒（通用），对 3 个 340-400 bp 的文库进行定量重复 2 – 4 次。 如图所示NEBNext 试剂盒（橙色）比 Kapa 试剂盒 （灰色）对文库浓度定量的一致性有显著改善。
操作流程图
文库定量试剂盒组份
– NEBNext 文库定量预混液
– NEBNext 文库定量引物预混液
– NEBNext 文库定量 DNA 标准品 1–4
– ROX (低) 和 ROX (高)
– NEBNext 文库稀释缓冲液
