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T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK） 收藏
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特性
概述
T4 多聚核苷酸激酶能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链 DNA 或 RNA）的 5´ -羟基末端以及 3´ -单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶（NEB #M0201）还具有 3´ 磷酸酶活性，将 3´ -磷酸基团从寡核苷酸的 3´ 磷酸末端、脱氧 3´ -单磷酸核苷和脱氧 3´ -二磷酸核苷上水解掉。经修饰后的酶（NEB #M0236）具有所有激酶的活性，但是缺失了 3´ 磷酸酶活性。
来源
重组 E. coli 菌株，克隆有 T4 多聚核苷酸激酶基因。
反应条件
热失活：65℃ 加热 20 分钟。
注意事项
达到最佳酶活力，需要新鲜缓冲液（在旧缓冲液中，由于氧化造成的 DTT 含量减少会降低酶活力）。
放射性标记反应：50 μl 反应体系中，用 1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50 pmol 的 γ-[32P] ATP 和 20 单位的酶 37℃ 温育 30 分钟可催化 1-50 pmol 的 5´ 末端磷酸化。[33P] ATP 可代替 [32P] ATP 作标记反应。
CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及 dTTP 均可替代 ATP 作为磷酸供体。
DNA 或 RNA 磷酸化反应（放射性和非放射性）操作流程请联系我们。
要提高平齐末端或 5´ 凹陷末端的磷酸化效率，可在加入 T4 多聚核苷酸激酶前，先将 DNA 溶液于 70℃ 加热 5 分钟，然后冰上冷却，并加入 5%（w/v）的 PEG-8,000。
T4 多聚核苷酸激酶需要 ATP 才能发挥活性，但是为了适用于高活力的放射性标记反应，在随酶提供的反应缓冲液中不含 ATP。
质保声明
T4 多聚核苷酸激酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。
单位定义
1 单位即 1 个 Richardson 单位，指 37℃条件下，30 分钟内催化 1 nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量（1）。单位活性检测条件请联系我们。
浓度
10,000 units/ml。
参考文献
关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。
T4 多聚核苷酸激酶反应
在 50 μl T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液体系中，37℃温育 30 分钟，γ-磷酸基团从 ATP 转移至 d(T)8 的 5´ 羟基末端 [ATP 与 d(T)8 比例是 1:1，量为 50 pmol]，结果显示 20 单位酶量可使超过 90% 的磷酸基团转移。
