Taq DNA 聚合酶(提供标准 Taq 缓冲液) 货 号 #M0273E-NEB酶试剂

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Taq DNA 聚合酶(提供标准 Taq 缓冲液)                              收藏

Taq DNA 聚合酶(提供标准 Taq 缓冲液)                  货   号                  #M0273E Taq DNA 聚合酶(提供标准 Taq 缓冲液)                  货   号                  #M0273E Taq DNA 聚合酶(提供标准 Taq 缓冲液)                  货   号                  #M0273E Taq DNA 聚合酶(提供标准 Taq 缓冲液)                  货   号                  #M0273E Taq DNA 聚合酶(提供标准 Taq 缓冲液)                  货   号                  #M0273E Taq DNA 聚合酶(提供标准 Taq 缓冲液)                  货   号                  #M0273E

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#M0273E
20,000 units
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Taq DNA 聚合酶(提供不含 Mg2+ 的标准 Taq 缓冲液)
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Taq 2X 预混液 
Quick-Load Taq 2X 预混液
Taq 5X 预混液
多重 PCR 5X 预混液
 
热启动 Taq 产品
Taq 热启动 DNA 聚合酶
Taq 热启动 2X 预混液

 

 

Taq DNA 聚合酶信息

Taq DNA 聚合酶(提供标准 Taq 缓冲液)                  货   号                  #M0273E

概述

Taq DNA 聚合酶是一种耐热聚合酶,具有 5´ →3´ 聚合酶活性和 5´ 结构特异性核酸内切酶活性。该酶是 PCR 中应用最广泛的酶。为了便于各种 PCR 反应,Taq DNA 聚合酶配套有不同的反应缓冲液。标准 Taq缓冲液专门针对已有的 PCR 平台所设计,它是 DHPLC 和高通量实验的理想选择。NEB 设计的 ThermoPol 缓冲液能够提高反应产量,即使是在苛刻的条件下也表现不凡。更为方便的是,Taq DNA 聚合酶还有试剂盒以及预混液两种剂型可供选择。此外还提供了 Quick-Load Taq 2X 预混液剂型,可用于直接凝胶上样。

Taq 热启动 DNA 聚合酶

超高的性价比、有吸引力的商业条款,NEB 的热启动 Taq 是分子诊断和其它应用的理想选择。与化学修饰或基于抗体结合的热启动聚合酶不同,NEB 的热启动 Taq 利用一种基于核酸适配体(aptamer)技术。这种独特的核酸适配体通过非共价键作用与聚合酶结合,从而抑制聚合酶在非许可温度下的聚合反应。这种新方法不需要激活步骤,减少样品降解的可能性、缩短整个反应时间。

其它剂型

为了加样方便,Taq 与 Taq 热启动 DNA 聚合酶均有预混液剂型可供选择。Taq 2X 预混液还有 Quick-Load 的形式,可用于直接凝胶上样。Taq PCR 试剂盒包含 Taq DNA 聚合酶、dNTP 混合液、缓冲液、MgCl和紫色 Quick-Load 2-Log DNA Ladder。
 
多重 PCR 5X 预混液配方经过专门优化可以提高多重 PCR 反应的表现。

浓度

5,000 units/ml。

Taq 缓冲液选择表

Taq DNA 聚合酶(提供标准 Taq 缓冲液)                  货   号                  #M0273E

Luna® 通用 qPCR 预混液 货 号 #M3003E-NEB酶试剂

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Luna® 通用 qPCR 预混液                              收藏

Luna® 通用 qPCR 预混液                 货   号                  #M3003E Luna® 通用 qPCR 预混液                 货   号                  #M3003E Luna® 通用 qPCR 预混液                 货   号                  #M3003E Luna® 通用 qPCR 预混液                 货   号                  #M3003E Luna® 通用 qPCR 预混液                 货   号                  #M3003E

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#M3003E
2500次反应
10,659.00

#M3003L
500次反应
2,629.00

#M3003S
200次反应
1,169.00

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100次反应
619.00

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相关产品:

南极热敏 UDG

特性

· 一种应用对应一种产品,简化选择
· 方便的预混液形式及易操作的实验步骤
· 肉眼可见的示踪染料避免加样失误
· Luna 系列产品经过严格的优化及检测以确保特异性、灵敏度、精确性及可重复性
· 独特校正染料,与多种 qPCR 设备兼容

概述

快速、灵敏、精确的实时荧光染料定量检测 DNA cDNA

使用实时荧光染料定量 PCR 时,最常用的荧光染料是 SYBR® Green I,后者与双链 DNA 结合,检测每个 PCR 循环中的 DNA 扩增情况。Cq 值是循环数量值,即检测到的荧光信号超过背景本底信号域值所经历的循环数,该 Cq 值可用于评估两个或两个以上的样本之间的相对丰度,也可以与已知浓度系列稀释的标准曲线进行对比,读取样本绝对值。

 

NEB Luna Universal qPCR Master Mix 是经过优化的 2X 预混液,可以用于实时定量 PCR检测和目标 DNA 的定量,适用于具有 SYBR®/FAM 通道的大部分 qPCR 设备。预混液含有热启动 Taq DNA 聚合酶及独特校正染料,与一系列 qPCR 设备兼容;预混液中使用了 dUTP,以防止产物残留污染;预混液中还加有非荧光染料,便于建立反应时进行肉眼观察,该染料的光谱与 qPCR 荧光染料不重叠,因此不会影响到实时检测数值。

 

预混液为 2X,包含除了模板和引物以外,用于 PCR 扩增和定量检测的所有组分。可以使用商业化的 qPCR 分析引物,用 Luna qPCR 产品进行基因组 DNA 或者 cDNA 的定量分析。 

 

图表一:NEB Luna Universal qPCR Master Mix qPCR 带来更高灵敏度及可重复性

   Luna® 通用 qPCR 预混液                 货   号                  #M3003E

 使用 Luna Universal qPCR Master Mix 检测目标中 GAPDH 基因的表达情况,模板为 6个分别 10 倍稀释的 Jurkat cDNA (20 ng – 0.2 pg),每个浓度的样品做8个复孔。cDNA 是使用 NEB Protoscript® II First Strand cDNA Synthesis Kit (NEB #E6560) Jurkat 的总 RNA 反转录得来。

  

图表二:NEB Luna Universal qPCR Master Mix 为不同来源的 DNA 都能提供更高灵敏度和精确度的检测和定量

Luna® 通用 qPCR 预混液                 货   号                  #M3003E

 Luna Universal qPCR Master Mix 可以检测不同来源的基因组 DNA。使用 ABI 7500 快速荧光定量仪器,50 ng – 0.5 pg 的基因组 DNA 对目标进行实时定量检测。基因组 DNA使用传统的柱纯化方法纯化。无论从小鼠肾脏的基因组检测 ACTB 基因、烟草基因组 DNA 检测 psbB 基因、还是从酵母基因组 DNA 中检测 rdn18SLuna 产品都有非常优秀的表现。

 

图表三通过与市场上基于染料的 qPCR 试剂对比,NEB Luna 产品体现出了更优的稳定性和特异性

 Luna® 通用 qPCR 预混液                 货   号                  #M3003E

使用 NEB 公司和其它供应商的试剂,分别对来自于 Jurkat 基因组 DNAJurkat cDNA不同丰度、长度和 GC 含量的 16-18 个目的基因进行检测(使用 Bio-Rad 机器检测 10 个基因组模板和 8 cDNA 模板,使用 ABI 的机器检测9个基因组模板和7 cDNA 模板)。每份检测结果由两个实验者根据厂商要求分别得到。使用反应效率、最低检测值以及无模板扩增来衡量结果(ΔCq = average Cq of lowest input – average Cq of non-template control)。此外,一致性、可重复性以及曲线的整体质量评估也作为实验的参考(标准分数)上面的点状图展示了符合可接受的性能标准的百分比(绿框圈起来的点的标准分>3)。不同厂商的结果如上图所示,从左到右分别是:NEBBio-Rad, SsoAdvanced™ Universal SYBR® Green Supermix Roche, FastStart™ SYBR Green Master QIAGEN, QuantiTect® SYBR Green PCR Kit ABI, PowerUP™ SYBR Green Master Mix Promega®, GoTaq® qPCR Master MixNEB Luna Universal qPCR Master Mix 表现优于所有其它供应商试剂的结果。

注释

 1.  引物设计

使用相关软件(如 Primer 3)设计 qPCR 引物时,在减少非特异性扩增和引物二聚体的情况下提高扩增成功率。引物的 GC 含量为 40–60% 可以保证最大的扩增效率。在可能的情况下,尽可能多的输入目标周围区域序列,以便引物序列设计更加完善。使用检索功能,检索相关数据库以避免非特异性扩增。如果模板是 cDNA ,在设计引物的时候可以跨内含子区域来避免基因组的非特异性扩增。相反,如果引物设计在内含子区域则可以保证基因组区域的特异性扩增。

2.  引物浓度

对于大多数模板来说,引物的终浓度 250 nM 就可以达到要求。如果需要的话,引物的浓度可以在 100–500 nM 之间优化。

3.  扩增子长度

为了确保 qPCR 结果的成功和一致性,PCR 效率的最大化非常重要。其中一方面就是设计短的 PCR 产物(70-200 bp)。如果反应产物超出范围,可能需要对实验进行优化(比如增加延伸时间等)

4.  模板准备及相关浓度

Luna qPCR 试剂与通过典型的核酸纯化方法纯化的 DNA 样本都兼容。制备好的 DNA 可以长期稳定储存在包含 EDTA 的缓冲液中(如 1X TE),实验时使用 TE buffer 或者水进行稀释。

一般来说,标准品和未知样品的浓度范围应该在 1 个拷贝到 106 个拷贝之间。如果是大型基因组样本(如人类或老鼠的 gDNA)一般浓度为 50 ng-1 pg。如果是小型基因组样本,可以参考使用1 个拷贝到 106 个拷贝的浓度。对于单一样本的稀释,样本中需要包含多个拷贝和空白对照。对于 cDNA 样本,可以使用 1 μg0.1 pg RNA 的反转录产物。cDNA 样本不需要纯化,但是在使用之前需要至少稀释 10

5.  ROX 校正染料

有些实时定量设备建议使用校正染料(通常是 ROX)来校正由于气泡、微小的体积差别、管与管之间的差异及反应过程中尘埃或者微粒的自发荧光造成的反应差距。Luna Universal qPCR Master Mix 包含了通用型的校正染料,可以兼容不需要使用校正染料以及需要使用低浓度或者高浓度校正染料(ROX)的一系列的荧光定量检测仪器。因此,在使用这些仪器进行 qPCR 实验时,不需要额外的组分。

6.  预防污染

qPCR 是一种非常灵敏的检测方法,前个 qPCR 产物污染下一个样本会带来一系列的问题,如假阳性及灵敏度的下降。防止污染的最好办法就是严格按照程序操作,避免扩增后的开盖。为了进一步满足预防交叉污染的要求,Luna Universal qPCR Master Mix 中包含了 dUTP/dTTP,从而可以在扩增过程中将 U 掺入到 DNA 产物中。qPCR 前使用尿嘧啶 DNA 糖基化酶(UDG)进行预先处理,就可以水解含有尿嘧啶的产物,以防止污染后续试验。使用能够完全失活的 UDG 是至关重要的,否则 UDG 会破坏新合成的 qPCR 产物。

为了避免产物携带污染,在反应体系中加入终浓度为 0.025 units/μl 的南极热敏 UDGNEB #M0372)。欲将污染的可能性降到最低,最好在室温下建立反应或者在变性步骤前加上

25℃ 温育 10 分钟

7.  反应条件设定

由于聚合酶的热启动性,在实验前不需要预热机器,也不需要在冰上加样。

如果使用96 孔板,建议使用 20 μl 反应体积。

如果使用 384 孔板,建议使用 10 μl 反应体积。在设定仪器的循环条件时,保证在延伸结束时包含一次读板并在循环结束后生成溶解曲线以分析产物的特异性。

大部分应用分析反应 40 个循环就可以,低起始量的样本可以反应 45 个循环。

Luna® 通用探针法 qPCR 预混液 货 号 #M3004E-NEB酶试剂

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Luna® 通用探针法 qPCR 预混液                              收藏

Luna® 通用探针法 qPCR 预混液                 货   号                  #M3004E Luna® 通用探针法 qPCR 预混液                 货   号                  #M3004E Luna® 通用探针法 qPCR 预混液                 货   号                  #M3004E Luna® 通用探针法 qPCR 预混液                 货   号                  #M3004E Luna® 通用探针法 qPCR 预混液                 货   号                  #M3004E

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#M3004E
2500次反应
9,169.00

#M3004L
500次反应
2,259.00

#M3004S
200次反应
1,019.00

#M3004V
100次反应
539.00

#M3004X
1000次反应
4,129.00

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相关产品

南极热敏 UDG

特性

·一种应用对应一种产品,简化选择
·方便的预混液形式及易操作的实验步骤
·肉眼可见的示踪染料避免加样失误
·Luna 系列产品经过严格的优化及检测以确保特异性、灵敏度、精确性及可重复性
·独特校正染料,与多种 qPCR 设备兼容

概述

  NEB Luna 通用 qPCR 预混液是经过优化的2X 预混液,用于实时定量 PCR 检测和目标 DNA 的定量,适用于具有 SYBR®/FAM 通道的大部分 qPCR仪器。

NEB Luna 通用探针法 qPCR 预混液是经过优化的2X 预混液,通过使用水解探针来进行实时定量PCR 检测和目标 DNA 的定量。
Luna 预混液中含有热启动 Taq DNA 聚合酶及独特校正染料,可以兼容多种仪器平台,包含需要ROX 染料校正的仪器。这意味着实验操作过程中不需要额外添加染料。预混液中包含 dUTP,qPCR前使用 NEB 的南极热敏 UDG 进行预处理以防止产物残留污染。预混液中还加有肉眼可见的蓝色染料,在向透明多孔 PCR 板中加样时起指示作用。快速、灵敏、精确的 Luna qPCR 产品必将成为您实时定量实验的首选。

luna产品选择表

Luna® 通用探针法 qPCR 预混液                 货   号                  #M3004E 

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 货 号 #M3010E-NEB酶试剂

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液                              收藏

货 号
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#M3010E
2500 rxns
74,369.00

#M3010L
100 rxns
4,249.00

#M3010X
500 rxns
16,999.00

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产品描述

该产品为不含 No-RT 对照和无核酶水的预混液剂型
LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 (NEB #E3010) 包含反转录预混液、No-RT 对照、无核酶水
适用于 ARTIC SARS-CoV-2 测序流程,是 NEBNext® ARTIC SARS-CoV-2 试剂盒中的组分之一。
 

特性

· 单管预混液剂型,包含:随机六聚体引物和 oligo-dT 引物、dNTP、小鼠 RNase 抑制剂,以及 Luna 反转录酶。
·15 分钟内即可完成第一链 cDNA 合成,
·新型热稳定型 Luna 反转录酶能够有效改善实验表现
·与 Luna qPCR 预混液 (NEB #M3003,M3004) 联合使用,提升 RT-qPCR 检测功效
·包含无干扰、可视化蓝色示踪染料,有助于减少加样错误
·无引物剂型货号为 NEB #E3025
·该产品为不含无核酶水和 No-RT 对照的预混液剂型
 
1.   Josh Quick 2020. nCoV-2019 sequencing protocol v3 (LoCost).
     https://www.protocols.io/view/ncov-2019-sequencing-protocol-v3-locost-bp2l6n26rgqe/v3

概述

 LunaScript 反转录 SuperMix 为优化的反转录预混液,可用于第一链 cDNA 合成、扩增子测序,以及两步法 RT-qPCR。该预混液含有具备热稳定特性的 Luna 反转录酶,可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂,以保护模板 RNA 免受降解。LunaScript 反转录 SuperMix 预混液含有随机六聚体引物,Oligo-dT 引物,可均匀覆盖整个 RNA 靶标。此外,预混液还包含蓝色染料,可在两步法 RT-qPCR 起到示踪作用。样品起始量从高达 1 µg 到低至单拷贝 RNA,均能得到稳健、线性和灵敏的检测结果。

LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物) (NEB #E3025) 包含除引物外,第一链 cDNA 合成所需的所有组分,适用于 RT-PCR、RNA-seq 及其它应用。该预混液与随机引物、oligo dT 引物以及基因特异性引物兼容,让 cDNA 合成更灵活。更多信息请点击 https://www.neb.cn/products/e3025-lunascript-rt-master-mix-kit-primer-free

与 LunaScript 试剂盒版本 (NEB #E3010) 相比,该 LunaScript 预混液版本不含无核酶水和 No-RT 对照。更多信息如下:

图 1:LunaScript 产品比较

 LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

图 2:一步法和两步法 RT-qPCR 产品选择

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

图 3:LunaScript® SuperMix 反转录预混液在两步法 RT-qPCR 实验中展现了出色的灵敏度、线性关系和重复性

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

 

在 20 μl 反应体系中,使用 1 X LunaScript 反转录 SuperMix预混液,在标准反应条件下(25℃/2 分钟,55℃/10 分钟,95℃/1 分钟)将 RNA 反转录为 cDNA。然后使用 1 μl cDNA 作为模板和 Luna 通用 qPCR 预混液(NEB#M3003)进行 qPCR 定量,每种浓度做三个重复。
A. 将梯度稀释的 Jurkat 总 RNA(1 μg–1 pg)反转录为 cDNA,然后对 β-actin 进行 qPCR 定量。
B. ERCC 对照(External RNA Controls Consortium)mix1 RNA 包含 50 – 5×109 拷贝的ERCC00130(10 fg–~10 ng),反转录为 cDNA 后进行 qPCR 进行定量。

图 4:LunaScript 反转录 SuperMix 预混液可覆盖长转录本

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

在标准反应条件(25℃/2 min、55℃/10 min、95℃/1 min)下,20 μl反应体系中,使用 1X LunaScript 反转录 SuperMix 预混液,将 Jurkat 总 RNA (1 μg – 1 ng) 反转录为 cDNA。取 1 μl cDNA 产物做为模板,使用 Luna 通用 qPCR 预混液 (NEB #M3003) 和覆盖 HERC1 整个 15.2 kb 转录本的 8 对引物,对 cDNA 覆盖度进行 qPCR 评估。结果显示:所有扩增靶标在每个上样浓度的重复实验中,均有良好扩增。

 

图 5:LunaScript 反转录 SuperMix 预混液对 RNA 靶标展现了出色的线性检测能力

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

使用市售的 cDNA 合成预混液,根据各厂商产品说明书,将 100 pg–1 μg 人(Jurkat)总 RNA 反转录为 cDNA。然后通过 8 个靶标(丰度、长度和 GC 含量不同)的 qPCR 结果对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用 qPCR 预混液(NEB#M3003)或 Luna 通用探针法 qPCR 预混液(NEB#M3004)进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq,其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照(NTC)扩增(ΔCq = NTC 的平均 Cq–最低起始量的平均 Cq)。绿色框表示目标扩增表现(效率 = 90-110%,ΔCq≥3)。
了解更多“Dots in Boxes”可视化荧光定量评价方法,请联系我们。:https://www.neb.cn/tools-and-resources/video-library/dots-in-boxes-visualization-of-qpcr-data

 

图 6:LunaScript 反转录 SuperMix 预混液的第一链 cDNA 合成时间最短,仅需 13 分钟。

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

比较了不同厂家的 cDNA 合成方案。LunaScript 反转录 SuperMix 预混液需要的反应时间最短,并可以耐受高温,避免了 RNA 复杂二级结构的影响。

 

图 7:LunaScript 反转录 SuperMix 预混液在室温条件下稳定性极佳

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

LunaScript 反转录 SuperMix 预混液与其它市售反转录产品在 25℃条件下放置 15 天,之后在说明书推荐反应条件下,以 100 pg–1 μg 人总 RNA (Jurkat) 为模板,反转录成为 cDNA。使用 Luna 通用 qPCR 预混液(NEB#M3003)对 8 个不同丰度、长度和 GC 含量的靶标进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq,其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照(NTC)扩增(ΔCq = NTC 的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq)。绿色框表示目标扩增表现(效率 = 90-110%,ΔCq≥3)。