Q5^® 超保真 DNA 聚合酶

Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶

Q5 热启动超保真 2X 预混液

Q5 超保真 PCR 试剂盒

Q5 定点突变试剂盒

Q5 定点突变试剂盒（不含感受态细胞）

Q5 超保真 DNA 聚合酶，以其无与伦比的扩增保真性（＞ Taq 酶的 100 倍）及其超低的错配率，建立了高保真聚合酶的新标准。Q5 DNA 聚合酶是一种新型聚合酶，携带具有持续合成能力的 Sso7d DNA
结合域，能够提高反应速度、保真度和稳定性。
Q5 反应缓冲液系统使扩增范围更广泛，无论模板 GC 含量的高低，Q5 超保真 DNA 聚合酶均以最少的优化，表现出卓越的扩增能力。对于常规或 GC 含量 ≤ 65% 的复杂模板，使用 Q5 反应缓冲液可以进行可靠的、超强的扩增；对于高 GC 含量的模板（＞ 65%），添加 Q5 High GC Enhancer 确保最大的扩增性能。

与化学修饰或基于抗体结合的热启动机制相比，NEB 的 Q5 采用了独特的核酸适配体修饰的热启动方式。该核酸适配体结构通过非共价键作用与聚合酶结合，在建立反应时可有效封闭聚合酶活性。Q5 热启动聚合酶在常规热循环条件下才能发挥作用，因此可在室温条件下建立反应体系。Q5 热启动 DNA 聚合酶无需额外的高温激活
步骤，从而减少了样品降解的可能性，缩短了反应时间，使操作更为简便。无论 GC 含量高低，Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶都能表现出高特异性扩增性能和广泛的模板适应性，是您理想的选择。为了加样方便，Q5 和 Q5 热启动 DNA 聚合酶均有单酶或预混液剂型可供选择。预混液中包含 dNTPs、Mg++ 和所有必需的缓冲液组份。

为了加样方便，Q5 DNA 聚合酶有预混液或试剂盒剂型可供选择。Q5 超保真 PCR 试剂盒包含 Q5 超保真 2X Master Mix、无核酸酶污染的水、Quick-Load 紫色 2-Log DNA Ladder。关于 Q5 定点突变试剂盒（包含或不包含感受态细胞）的详细信息见 104 页。

2,000 units/ml。

Q5 (A) 和 Q5 热启动 (B) 超保真 DNA 聚合酶具有超强扩增能力，可用于任何 GC 含量的扩增。使用 Q5 或 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶扩增从低到高不同 GC 含量的人类基因组 DNA。使用 Q5 热启动的反应在室温下建立，所有的反应均为 30 个循环并用微流控芯片技术（microfluidic LabChip® analysis）检测。

· 无需 DNA 纯化，可直接使用人全血细胞或干血斑样品进行扩增

 Q5^® 血源直扩 2X 预混液可以免除 DNA 纯化步骤，直接使用干血斑或含高达 30% 的全血样品进行各种靶标扩增。该预混液包含 Q5^® 热启动超保真 DNA 聚合酶，该酶热稳定性好，具有 3′→ 5′ 外切酶活性，融合了具有增强持续合成能力的 Sso7d DNA 结合域，优化的 dNTP 缓冲液有效提高了对血液中扩增抑制成分、抗凝剂以及滤纸上化学品的耐受度。该产品能够从含有 EDTA 钠盐、EDTA 钾盐、枸橼酸钠和肝素钠的全血细胞以及从保存在普通防腐滤纸上的血样品中扩增长达 7.5 kb 的片段。 

根据说明书推荐的标准反应条件，使用 Q5® 血源直扩 2X 预混液进行 35 个循环的 PCR 扩增。使用 LabChip® 微流控分析仪对产率和纯度进行定量，结果分别以圆点的大小和颜色展示：圆点面积越大、绿色越深，则表示扩增性能越强。 A. 以 10% EDTA 保存的人全血为模板，扩增人基因组不同靶标（0.3 至 7.5 kb）。结果以模拟胶图（上）和相应的点图（下）呈现。结果显示：Q5® 血源直扩 2X 预混液在较大范围的模板长度区间内均表现良好。B. 以全血（上）或滤纸干血（底部）为模板，对人类基因组靶标（604 bp）进行扩增。人全血占总反应体积 (50 µl) 的 5-30%。将未经处理的 1 mm 打孔干血斑直接添加到 25 µl 反应体系中（每个反应一个打孔样品）。结果显示：Q5® 血源直扩 2X 预混液对不同的全血含量、防腐剂和各种类型的采血卡纸具有广泛的耐受性。

 

图 2：Q5^® 血源直扩 2X 预混液对各种靶标序列均能高效扩增

 

使用 Q5^® 血源直扩 2X 预混液和其它几种市售血液直扩聚合酶，分别对不同 GC 含量 (23-77%)（A图）和不同长度（2 -7 kb）（B 图）人类基因靶标进行 PCR。以 10% EDTA 保存的人全血为模板。根据说明书建议使用 50 µl 反应体系进行热循环。使用 LabChip^® 微流控分析仪进行定量，结果分别以圆点的大小和颜色表示产量和纯度。结果显示：Q5^® 血源直扩 2X 预混液对于各种类型的靶标均表现优异。

 

图 3：在各种滤纸，血液防腐剂、反应体系中表现稳定

根据说明书推荐的标准反应条件，使用 Q5^® 血源直扩 2X 预混液对干血中的人类基因组靶标（604 bp）进行 PCR。将不同抗凝剂抗凝的血样采集于 Whatman 903 或 FTA Elute 卡纸上，在上述干血卡纸打孔，分别直接加入到 20、25 或 50 μl 反应体系中。结果显示：在各种体积的反应体系、抗凝剂或滤纸类型中，均能达到稳健扩增。