酵母蛋白小量提取试剂盒 P1140

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酵母蛋白小量提取试剂盒 Jinpan P1140

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酵母蛋白小量提取试剂盒

一,试剂盒组份

组份

 (50T)

 (100T)

酵母裂解液

50mL

100mL

玻璃珠

3g

6g

PMSF(100X)

1ml

1ml

β-巯基乙醇

1ml

1ml

二,说明

酵母蛋白小量提取试剂盒用于从酵母细胞中分提取可溶性各种蛋白。提取的蛋白可用于各种常规实验。如PAGEWestern,免疫沉淀(immunol precipitationIP)和免疫共沉淀(co-IP)。酵母裂解液中不含任何去污剂,可用各种方法测定蛋白含量。

三,操作步骤

1.   酵母常规培养。

2.   离心收集酵母。大概50100ul的积压体积。*弃上清。

3.   加入酵母裂解液,吹打重重悬。再次离心,弃上清(此步的目的是将酵母洗一下,也可以省掉此步)。

4.   在酵母菌中,再加入0.5ml裂解液,加入5ul PMSF5ulβ巯基乙醇(在通风处操作)。加入50mg左右的玻璃珠,预冷,涡流10min(每涡流1min,可以冰上冷却1min)。

5.   离心,取上清。进行下一步实验或者-70储存。

四,注意事项

1,不同的酵母可能须涡流时间不同,可根据实际情况延长或者缩短时间。(比如蛋白浓度高低,蛋白降解情况等。)

2,如果一个月内能够用完,可将β巯基乙醇按照百分之一的量一次性全部加入酵母裂解液中。28度保存。

3,因为是采用物理方法破解酵母壁,所以对于酶等一些易失活蛋白可能并不适合。

4,为了你的实验安全,请戴手套操作。并注意通风。