基于SYBR Green I的一步法qRT-PCR用于基因表达分析
•*的两步热启动程序使得体系构建可在室温条件下进行
•可显色的加样对照，减少加样错误
•内质控可用于验证RT-PCR是否成功的阳性对照
•可在几个数量级范围内对模板精确定量
•超快速、通用实验方案，适用于任何标准或快速PCR仪

基于SYBR Green I的一步法qRT-PCR用于基因表达分析

• *的两步热启动程序使得体系构建可在室温条件下进行
• 可显色的加样对照，减少加样错误
• 内质控可用于验证RT-PCR是否成功的阳性对照
• 可在几个数量级范围内对模板精确定量
• 超快速、通用实验方案，适用于任何标准或快速PCR仪

QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit基于SYBR Green I染料方法，可对RNA靶标进行灵敏的一步法实时定量检测。该试剂盒具有多重综合保障设置，可有效去除各种波动因素并消除人为误差，确保获得可靠的基因表达谱。*的两步热启动流程与预混液形式的PCR缓冲体系搭配，使您可以在室温条件下进行实验体系构建，并保证在任何一台实时PCR仪上均能获得高度灵敏的qRT-PCR结果。QuantiNova Internal Control RNA可用于检测逆转录和扩增反应是否成功，可反映仪器或反应试剂是否正常，以及构建的反应体系是否存在错误，包括是否存在抑制剂。另外，可视化的颜色指示剂有助于减少加样错误，确保可在１小时之内完成超快速的RT-PCR处理。

Performance

QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit使用两步法的热启动操作流程。这一操作流程包括，在50°C下热激活HotStaRT-Script逆转录酶，在95°C下热激活PCR聚合酶。在低于50°C时，HotStaRT-Script和一种RT-Blocker分子形成复合体，进入失活状态。当温度达到50°C时，复合物分解， 释放出活性状态的HotStaRT-Script酶。QuantiNova DNA Polymerase在QuantiNova Antibody和一种新型添加剂QuantiNova Guard的作用下一直处于失活状态，其中QuantiNova Guard起着保持复合物稳定性的作用。这种设计使得热启动操作流程的严格程度进一步提高，避免了非特异性退火引物延伸或形成引物二聚体。温度达到95°C后两分钟内，QuantiNova Antibody和QuantiNova Guard发生变性，QuantiNova DNA Polymerase激活，PCR扩增开始。这一*的两步法热启动操作流程使得反应构建工作可在室温下稳定保持2小时以上，消除了假阳性结果出现的可能，并可实现体系构建的自动化。

新研发的内质控是一种成分明确的转录本（RNA分子），可直接加入您的样本并被同时逆转录为cDNA。这种内质控可以直接反应仪器或相应试剂是否正常，实验构建的体系是否存在错误，以及反应体系中是否存在抑制剂。由于内质控的表现和真实转录本相似，因而可用来确认逆转录和PCR扩增过程的成功与否。

QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit随附的预混液中包含一种惰性蓝色染料，这种染料不会干扰逆转录或real-time PCR进行，但可增加试管或板孔中液体溶液的可见性。QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer包含一种惰性黄色染料，将使用QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer稀释的模板核酸加入预混液后，溶液的颜色会从蓝色变为绿色，从而通过颜色变化指示出加样和反应构建正确与否。

QuantiNova DNA Polymerase以及RT-PCR缓冲液的*配方组合，使您可以灵敏地定量检测低拷贝RNA靶标，并且可以在任何一台普通PCR仪上进行宽线性范围的精确定量。

Principle

QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit包含经优化的即用型预混液，可通过SYBR Green I荧光染料进行高度特异、灵敏的实时定量检测RNA靶标。该试剂盒包含一种*的K⁺和NH₄⁺离子平衡PCR缓冲液，可以提高引物退火特异性，实现检测的高特异性和高灵敏度。此外，HotStaRT-Script合成cDNA可兼容的模板量范围极广，同时，QuantiNova DNA Polymerase具有严格的热启动程序，避免了非特异性产物的生成。*的两步法热启动流程使得体系构建可在室温下稳定保持２小时以上，并可支持自动化体系构建。

​内置的可视化显色对照可用来指示模板是否已加入反应体系，从而避免实验操作过程中的加样错误。

检测cDNA的合成情况，可以验证实验结果的可重复性。我们新研发的内质控是一种序列已知的转录本（RNA分子），可选择性加入到您的样本中并被同时逆转录为cDNA。其可直接反应仪器或相应试剂是否正常，实验构建的体系是否存在错误，以及反应体系中是否存在抑制剂。

Procedure

QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit使您不需要对反应条件进行优化，省去了大量麻烦，节省了时间。只需将引物、RNA模板和逆转录混合物加入即用型SYBR Green RT-PCR预混液，反应即可开始。根据QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit说明书内的实验方案操作，即可在任意一台real-time PCR仪上迅速获得可靠的结果。

Applications

QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit可用于在任何一台real-time PCR仪上检测RNA靶标的表达水平。其适用的PCR仪包括QIAGEN的Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪，以及Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent等公司的仪器。