EpiMark 甲基化 DNA 富集试剂盒 货 号 #E2600S-NEB酶试剂

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产品资料 – 表观遗传学 – 表观遗传学

EpiMark 甲基化 DNA 富集试剂盒                              收藏

EpiMark 甲基化 DNA 富集试剂盒             货   号                  #E2600S

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#E2600S
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特性

 高亲和性以确保最佳灵敏度
 小体积洗脱,简化下游应用
 简单明了的实验步骤,2 小时内完成富集
 富集的甲基化 DNA 易与双链接头连接,进行高通量测序
 较宽泛的样品起始 DNA 浓度,均可得到高纯度富集产物

概述

EpiMark 甲基化 DNA 富集试剂盒可有效的富集基于 CpG 密度的双链 CpG 甲基化 DNA。该试剂盒利用人 MBD2a 蛋白的甲基-CpG 结合域作为捕获诱饵,并将该结合域与人 IgG1 的 Fc 尾部融合表达形成 MBD2a-Fc 复合蛋白,再偶联上 ProteinA 磁珠形成 MBD2a-Fc/Protein A 磁珠复合物。这个稳定的复合物可以选择性的结合 CpG 甲基化的双链 DNA。高亲和性的磁珠与优化的试剂相配合,极大的提高了灵敏度和精确性。试剂盒提供所有所需试剂,2 小时内就能完成 4 步富集反应。
EpiMark 甲基化 DNA 富集试剂盒             货   号                  #E2600S

 

EpiMark 甲基化 DNA 富集试剂盒包括

– MBD2-Fc 蛋白
– Protein A 磁珠
– 结合/洗涤缓冲液
– 高盐洗脱缓冲液
– 片段化 HeLa DNA
– Line element 引物(作为甲基化基因座对照)
– RPL30 引物(作为非甲基化基因座对照)
– MirA 基因座对照引物

参考文献

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EpiMark® 5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒 货 号 #E3317S-NEB酶试剂

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EpiMark® 5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒                              收藏

EpiMark® 5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒                货   号                  #E3317S EpiMark® 5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒                货   号                  #E3317S EpiMark® 5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒                货   号                  #E3317S EpiMark® 5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒                货   号                  #E3317S

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#E3317S
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特性

 定量分析基因座内的 5-hmC 和 5-mC,重复性好
 简单明了的实验步骤
 与现有 PCR 技术相兼容
 可用于高通量用户
EpiMark® 5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒                货   号                  #E3317S

概述

EpiMark 5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒是一种简单快速试剂盒,能对特定 DNA 位点内的 5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)和 5-甲基胞嘧啶(5-mC)进行定性及定量。这种酶学方法包括三步简单操作,利用了同裂酶 MspI 和 HpaII 对甲基化敏感性的不同。
 
简述三步操作如下:基因组 DNA 用 T4 噬菌体β-葡糖基转移酶和 UDP-葡萄糖处理,将所有的 5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)糖基化;用限制性内切酶 MspI 和 HpaII 消化 DNA,这两个同裂酶有不同的甲基化敏感性;然后用终点或实时 PCR 来定性和定量不同的甲基化状态。EpiMa r k 试剂盒的设计目的是简化甲基化分析,增加发现新生物靶标的可能性。

EpiMark 5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒包括

– T4 噬菌体 β-葡糖基转移酶
– UDP-葡萄糖
– MspI
– HpaII
– 蛋白酶 K
– 对照 DNA(未修饰的 5-羟甲基胞嘧啶和 5-甲基胞嘧啶)
– 正反向对照引物混合物
– NEBuffer 4
EpiMark® 5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒                货   号                  #E3317S
用 EpiMark 5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒分析 Balb/C 小鼠组织样品(基因座 12)不同的甲基化状态。A)用于甲基化分析的 6 个不同反应的终点 PCR。虚线框中的泳道显示了 5-羟甲基胞嘧啶的存在。B)实时 PCR 数据用于确定 5-羟甲基胞嘧啶和 5-甲基胞嘧啶的数量。结果显示了所选组织中 5-羟甲基胞嘧啶水平的变化。

参考文献

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EpiMark 重亚硫酸盐转化试剂盒 货 号 #E3318S-NEB酶试剂

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EpiMark 重亚硫酸盐转化试剂盒             货   号                  #E3318S

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#E3318S
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特性

 完全转化未修饰的胞嘧啶为尿嘧啶
 简单明了的实验步骤
 稳定可靠的结果
 提供纯化柱

概述

重亚硫酸盐转化试剂盒可以检测每个胞嘧啶基团的甲基化状态,并可根据大规模测序要求进行相应调整。该试剂盒能将未修饰的胞嘧啶转化为尿嘧啶,而 5-mC 和 5-hmC 修饰的胞嘧啶则不被改变。借助在重亚硫酸钠中进行加热、变性交替循环处理,重亚硫酸盐转化试剂盒可以检测到甲基化修饰的胞嘧啶。试剂盒提供所有试剂包括离心柱。经重亚硫酸盐处理后的样本,可用 EpiMark 热启动 Taq DNA 聚合酶进行扩增。

重亚硫酸盐转化试剂盒包含以下组份

 – 偏重亚硫酸钠

– 溶解缓冲液
– 脱磺化反应缓冲液
– EpiMark 离心柱及 2 ml 收集管
– 结合缓冲液
– 洗涤缓冲液
– 洗脱缓冲液

参考文献

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EpiMark 核小体组装试剂盒 货 号 #E5350S-NEB酶试剂

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产品资料 – 表观遗传学 – 组蛋白

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EpiMark 核小体组装试剂盒               货   号                  #E5350S EpiMark 核小体组装试剂盒               货   号                  #E5350S EpiMark 核小体组装试剂盒               货   号                  #E5350S

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#E5350S
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单独出售的组份

重组人类组蛋白 H3.1/H4 四聚体
#M2509S 1 nmol . . . .¥2,629
 
重组人类组蛋白 H2A/H2B 二聚体
#M2508S 2 nmol . . . .¥2,629
 
核小体对照 DNA
#N1202S 0.2 nmol . . . .¥1,209

特性

 高纯度,重组系统
 预先形成的二聚体和四聚体复合物,简化八聚体形成
 各组成成分有效期为 1 年
 是 ChIP 分析、HAT 分析以及酶修饰分析(例如甲基化研究)的理想之选

概述

该试剂盒提供必要成分,加入靶 DNA 或者随试剂盒提供的对照 DNA 后形成未加修饰的重组人类核小体。操作步骤包括在高盐条件下,将 DNA 与已经形成并且纯化的重组人类组蛋白 H2A/H2B 二聚体及组蛋白 H3.1/H4 四聚体混合,然后通过透析降低盐浓度进而形成核小体。一个四聚体结合两个二聚体在 DNA 上形成八聚体,组成核小体。我们提供检测核小体形成的方法是观察凝胶电泳迁移率的改变。某些酶不能单独作用于 DNA 或者核心组蛋白中的某成分,那么这些核小体就可以作为这类酶的最佳底物。每次反应可以加入约 50 pmol 208 bp 的 DNA 生成核小体,根据实验需要可以适当缩放体系。 
 
重组人类组蛋白 H2A/H2B 二聚体是将变性、纯化的亚单位 H2A 和 H2B 复性后,再经凝胶过滤后获得。重组人类组蛋白 H3.1/H4 四聚体是将变性、纯化的亚单位 H3.1 和 H4 复性后,再经凝胶过滤后获得。二聚体和四聚体都经过高度纯化,可单独购买用于组蛋白修饰研究。
 
核小体对照 DNA 来源于 Lytechinus variegates 5SrDNA的 208 bp 片段,能用于核小体单体的形成。
EpiMark 核小体组装试剂盒               货   号                  #E5350S

EpiMark 核小体组装试剂盒包含

– 组蛋白 H2A/H2B 二聚体
– 组蛋白 H3.1/H4 四聚体
– 对照 DNA

参考文献

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抗 GLuc 抗体(已停产且无替代品) 货 号 #E8023S-NEB酶试剂

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产品资料 – 细胞分析 – Gaussia & Cypridina荧光素酶报告基因

抗 GLuc 抗体(已停产且无替代品)                              收藏

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#E8023S
0.2 ml
.00

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概述

抗 GLuc 抗体是免疫了全长重组 Gaussia 荧光素酶 (GLuc) 的兔血清 IgG 片段。可用来检测从细胞中分泌出的或细胞裂解液中的 GLuc。

特异性

用转染了 Gaussia 荧光素酶表达质粒的哺乳动物细胞的提取物测试。

用于 Western Blots 的建议稀释度

1:1000–1:5000。

SNAP-Cell 启动试剂盒(停产,组分可单独购买) 货 号 #E9100S-NEB酶试剂

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产品资料 – 细胞分析 – 细胞影像学及分析

SNAP-Cell 启动试剂盒(停产,组分可单独购买)                              收藏

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#E9100S
1套
2,699.00

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停产通知

产品于 2020 年 1 月 2 日停产,产品组分可单独购买

特性

 详细简便的标记步骤
 附有超强且特性明确的荧光基团
 包含对照质粒;能对表达蛋白进行精确的亚细胞定位
 无论检测蛋白位于细胞内还是细胞表面,都能提供精确定位

概述

为使研究者快速、简便地应用我们的蛋白质标记系统,我们的启动试剂盒提供了标记 SNAP-tag 或 CLIP-    tag 融合蛋白的所有必需组份,能在活细胞、固定细胞及体外将红色或绿色荧光基团共价连接到目标蛋白上。每种启动试剂盒包括一种编码所选 tag 的质粒和两种细胞通透性的或细胞非通透性的荧光标记物。试剂盒同时提供相应阳性对照质粒,其编码有明确亚细胞定位的标签蛋白(如:膜蛋白、核蛋白等)。试剂盒还会提供一个与目的标签相互作用的非荧光的阴性对照阻断剂。

荧光基团

每种荧光基团的亮度和稳定性都经过严格的验证。另外,每种荧光基团还要通过以下检测:细胞通透性(  SNAP-Cell 和 CLIP-Cell 产品)或特异性标记细胞表面蛋白的能力(SNAP-Surface,CLIP-Surface)。
 
SNAP-Cell 启动试剂盒(停产,组分可单独购买)            货   号                  #E9100S
 
SNAP-Cell TMR-Star 和 CLIP-Cell TMR-Star 是光稳定的红色荧光底物,可用于分别标记活细胞内部、固定化细胞内部、细胞表面或体外的 SNAP-tag 或 CLIP-tag 融合蛋白。这些细胞通透性底物为四甲基罗丹明衍生物,可用标准罗丹明滤镜成像。当它们共价连接于 SNAP-tag 或 CLIP-tag 蛋白质后,能在波长 554   nm 处被激发,释放出波长为 580 nm的荧光。
 
SNAP-Cell 启动试剂盒(停产,组分可单独购买)            货   号                  #E9100S
 
SNAP-Cell 505-Star 和 CLIP-Cell 505 是光稳定的绿色荧光底物,可用于分别标记活细胞内部、固定化细胞内部、细胞表面或体外的 SNAP-tag 或 CLIP-tag 融合蛋白。这些细胞通透性底物可用标准荧光滤镜成像。当它们共价连接于 SNAP-tag 或 CLIP-tag 蛋白质后,能在 504 nm 波长处被激发,释放出波长为 532 nm 的荧光。
 
SNAP-Cell 启动试剂盒(停产,组分可单独购买)            货   号                  #E9100S 
 
SNAP-Surface 549 是光稳定的荧光底物,可以用于标记溶液中或活细胞表面的 SNAP-tag 融合蛋白。该细胞非通透性底物适于使用标准 TAMRA 或 Cy3 滤镜成像。当它共价连接于 SNAP-tag 融合蛋白后,能在    560 nm 波长处被激发,释放出波长为 575 nm 的荧光。
 
SNAP-Surface 488 和 CLIP-Surface 488 是光稳定的荧光底物,可用于分别标记溶液中、活细胞表面或固定化细胞表面的 SNAP-tag 或 CLIP-tag 融合蛋白。这些细胞非通透性底物可用标准荧光滤镜成像。当它们共价连接于 SNAP-tag 或 CLIP-tag 融合蛋白后,能在 506 nm 波长处被激发,释放出波长为 526 nm 的荧光。
 
CLIP-Surface 547 是一种光稳定的红色荧光底物,可用于标记活细胞表面的 CLIP-tag 融合蛋白。该细胞非通透性底物适于使用标准 TAMRA 或 Cy3 滤镜成像。当它共价连接于 CLIP-tag 融合蛋白后,能在 554 nm 波长处被激发,释放出波长为 568 nm 的荧光。
 

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SNAP-Surface 启动试剂盒 货 号 #E9120S-NEB酶试剂

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产品资料 – 细胞分析 – 细胞影像学及分析

SNAP-Surface 启动试剂盒                              收藏

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#E9120S
1套
2,699.00

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特性

 详细简便的标记步骤
 附有超强且特性明确的荧光基团
 包含对照质粒;能对表达蛋白进行精确的亚细胞定位
 无论检测蛋白位于细胞内还是细胞表面,都能提供精确定位

概述

为使研究者快速、简便地应用我们的蛋白质标记系统,我们的启动试剂盒提供了标记 SNAP-tag 或 CLIP-   tag 融合蛋白的所有必需组份,能在活细胞、固定细胞及体外将红色或绿色荧光基团共价连接到目标蛋白上。每种启动试剂盒包括一种编码所选 tag 的质粒和两种细胞通透性的或细胞非通透性的荧光标记物。试剂盒同时提供相应阳性对照质粒,其编码有明确亚细胞定位的标签蛋白(如:膜蛋白、核蛋白等)。试剂盒还会提供一个与目的标签相互作用的非荧光的阴性对照阻断剂。

荧光基团

每种荧光基团的亮度和稳定性都经过严格的验证。另外,每种荧光基团还要通过以下检测:细胞通透性( SNAP-Cell 和 CLIP-Cell 产品)或特异性标记细胞表面蛋白的能力(SNAP-Surface,CLIP-Surface)。

 

SNAP-Surface 启动试剂盒            货   号                  #E9120S

 
SNAP-Cell TMR-Star 和 CLIP-Cell TMR-Star 是光稳定的红色荧光底物,可用于分别标记活细胞内部、固定化细胞内部、细胞表面或体外的 SNAP-tag 或 CLIP-tag 融合蛋白。这些细胞通透性底物为四甲基罗丹明衍生物,可用标准罗丹明滤镜成像。当它们共价连接于 SNAP-tag 或 CLIP-tag 蛋白质后,能在波长 554   nm 处被激发,释放出波长为 580 nm 的荧光。

 
SNAP-Surface 启动试剂盒            货   号                  #E9120S
 
SNAP-Cell 505-Star 和 CLIP-Cell 505 是光稳定的绿色荧光底物,可用于分别标记活细胞内部、固定化细胞内部、细胞表面或体外的 SNAP-tag 或 CLIP-tag 融合蛋白。这些细胞通透性底物可用标准荧光滤镜成像。当它们共价连接于 SNAP-tag 或 CLIP-tag 蛋白质后,能在 504 nm 波长处被激发,释放出波为 532    nm 的荧光。
 
SNAP-Surface 启动试剂盒            货   号                  #E9120S 
SNAP-Surface 549 是光稳定的荧光底物,可以用于标记溶液中或活细胞表面的 SNAP-tag 融合蛋白。该细胞非通透性底物适于使用标准 TAMRA 或 Cy3 滤镜成像。当它们共价连接于 SNAP-tag 融合蛋白后,能在 560 nm 波长处被激发,释放出波长为 575 nm 的荧光。
 
SNAP-Surface 488 和 CLIP-Surface 488 是光稳定的荧光底物,可用于分别标记溶液中、活细胞表面或固定化细胞表面的 SNAP-tag 或 CLIP-tag 融合蛋白。这些细胞非通透性底物可用标准荧光滤镜成像。当它们共价连接于 SNAP-tag 或 CLIP-tag 融合蛋白后,能在 506 nm 波长处被激发,释放出波长为 526 nm 的荧光。
 
CLIP-Surface 547 是光稳定的红色荧光底物,可分别用于标记活细胞表面的 CLIP-tag 融合蛋白。这些细胞非通透性底物适于使用标准 TAMRA 或 Cy3 滤镜成像。当它们分别共价连接于 CLIP-tag 融合蛋白后,能在 554 nm 波长处被激发,释放出波长为 568 nm 的荧光。

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Luna® Cell Ready 裂解模块 货 号 #E3032S-NEB酶试剂

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

Luna® Cell Ready 裂解模块                              收藏

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#E3032S
100 rxns
5,959.00

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特性

 ·仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除
 ·一次反应高效可裂解 10 至 10 万个细胞,适用于众多细胞系
 ·与其它 RNA 提取方法相比减少了样品损失,尤其对于低细胞起始量。
 ·兼容高通量应用,可在室温下进行细胞裂解
 ·与 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒搭配使用时性能最佳:NEB#E3005(染料法)或 NEB#E3006(探针法) 
 ·提供完整的细胞裂解和一步法 RT-qPCR 试剂盒方案:NEB #E3030(染料法)或 NEB #E3031(探针法)

概述

   细胞培养常用于替代活体生物来分析基因表达或对治疗的反应。传统上使用柱提法或化学试剂法从处理过的细胞中提取和纯化 RNA.Luna Cell Ready 裂解模块无需进行传统的 RNA 提取步骤即可评估RNA表达水平,是一种快速、方便且灵敏的替代方案。该模块可同时进行细胞裂解、RNA 释放、基因组 DNA 去除,获得的细胞裂解物可直接使用Luna通用一步法 RT-qPCR 试剂盒进行 RT-qPCR 分析。与其它 Luna 产品一样,裂解缓冲液包含惰性蓝色示踪染料,使整个加样流程可视化。

下表列出的细胞系可使用 Luna Cell Ready 裂解模块裂解。这些细胞进行 5 log 梯度稀释(100000-10 细胞/50 µl 裂解反应),并取 1 ul 裂解产物进行 20 µl 体系的一步法 RT-qPCR 反应。每个细胞系的线性结果区域显示在最后一列。此外,经测试一些昆虫细胞系也能用上述裂解液裂解。

 

表一:经验证过的细胞系

细胞系

特性

菌种

50 ml 裂解体系中的细胞数量

A549

Adherent

H. sapiens, Lung, carcinoma

10 – 100,000

HEK293

Adherent

H. sapiens, Kidney

10 – 100,000

HeLa

Adherent

H. sapiens, Cervix, adenocarcinoma

10 – 100,000

HepG2

Adherent

H. sapiens, Liver, carcinoma

10 – 100,000

NCI-H460

Adherent

H. sapiens, Lung, carcinoma

10 – 100,000

SK-N-SH

Adherent

H. sapiens, Brain, Neuroblastoma

10 – 100,000

U2Os

Adherent

H. sapiens, Bone, osteosarcoma

10 – 10,000

Jurkat

Suspension

H. sapiens, T lymphocyte, leukemia

10 – 100,000

K-562

Suspension

H. sapiens, Lymphoblast, leukemia

10 – 1,000

 

图一:Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 实验流程

 

Luna® Cell Ready 裂解模块            货   号                  #E3032S

 

Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I 和 Luna Cell Ready 蛋白酶的功能,可简单高效的进行细胞裂解,仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。2 µl 裂解产物(相当于 0.2–4000 个细胞中的 RNA)即可实现 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。

 

试剂盒组分

 

随该产品提供的试剂

 

储存(°C

浓度

Luna Cell Ready Lysis Buffer

-20

2 X

Luna Cell Ready RNA Protection Reagent

-20

25 X

Luna Cell Ready Protease

-20

25 X

Luna Cell Ready Stop Solution

-20

10 X

DNase I RNase-free

-20

10 X

 实验需要但不提供的试剂耗材

  •    磷酸盐缓冲液(PBS
  •    目标特异性引物
  •    细胞
  •    Eppendorf
  •    PCR 联管
  •    PCR
  •    移液器和枪头(为减少交叉污染,应使用带滤芯的枪头)

    储存温度

 -20℃

OneTaq® RT-PCR 试剂盒 货 号 #E5310S-NEB酶试剂

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – RT-PCR

OneTaq® RT-PCR 试剂盒                              收藏

OneTaq® RT-PCR 试剂盒                货   号                  #E5310S OneTaq® RT-PCR 试剂盒                货   号                  #E5310S OneTaq® RT-PCR 试剂盒                货   号                  #E5310S OneTaq® RT-PCR 试剂盒                货   号                  #E5310S

货 号
规 格
价 格(元)
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成都库存
苏州库存

#E5310S
30 次反应
1,469.00

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小鼠 RNase 抑制剂
M-MuLV 反转录酶
OneTaq 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液)

特性

• 稳定的 RT-PCR 反应
• 便捷的预混液剂型
• OneTaq DNA 聚合酶对各种模板具有超强的扩增能力
 

 

概述

OneTaq RT-PCR 试剂盒含有两种强大的预混液,M-MuLV 酶预混液与 OneTaq 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液),可用于两步法的 RT-PCR 实验。这两种混合试剂可确保最快捷的建立反应和最稳定高效的 RT-PCR 反应,为 RT-PCR 反应的提供优秀的重复性和稳定性。
使用两种优化的混合液:M-MuLV 酶混合液和 MMuLV反应混合液合成第一链 cDNA。M-MuLV 酶混合液含 M-MuLV 反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂,MMuLV反应混合液中包含 dNTP 和经过优化的缓冲液。该试剂盒还包括两种优化的反转录引物和无核酸酶污染的水。锚定的 Oligo-dT 引物 [d(T)23VN]迫使引物与 polyA 尾的起始端退火。经过优化的随机引物混合液能随机并持续性的与整个 RNA 模板配对,包括 mRNA 与无 polyA 尾的 RNA。

OneTaq RT-PCR 试剂盒组成:

 – 10X M-MuLV 酶混合液

– 2X M-MuLV 反应混合液
– OneTaq 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液)
– 随机引物预混液(60 μM)
– Oligo d(T)23VN 引物(50 μM)**
– 无核酸酶污染的水
OneTaq® RT-PCR 试剂盒                货   号                  #E5310S
 
 
脾总 RNA 为模板合成第一链 cDNA,泳道 1、4 和 7
中加入 dT23VN,泳道 2、5 和 8 中加入随机 6 碱基引
物,泳道 3、6 和 9 为阴性对照反应。使用 OneTaq
热启动预混液分别对 beta-actin 基因、GAPDH 基因和
p532 基因进行 35 个循环的扩增,分别得到 1.5 kb 片
段、0.6 kb 片段和 5.5 kb 片段。Marker M 为 2-Log DNA
Ladder(NEB #N3200)。
 

BioBrick® 组装试剂盒 货 号 #E0546S-NEB酶试剂

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BioBrick® 组装试剂盒                              收藏

BioBrick® 组装试剂盒             货   号                  #E0546S

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停产通知

 停产通知:该产品于2021年12月15日停产。

概述

BioBrick® 组装试剂盒为克隆提供了一种简便有效的方法,它能 BioBrick 组装到多种基因系统中。BioBrick 是已知生物功能的 DNA 序列,能与其它 BioBrick 进行组装。组装任意两种 BioBrick 的方法完全相同,组装后形成一个新的 BioBrick。

请仔细阅读说明书中的每种试剂的使用方法和保存条件。


BioBrick® 是 BioBricks 公司的商标。(http://www.biobricks.org)

BioBrick® 组装试剂盒             货   号                  #E0546S 

BioBrick 组装试剂盒包含

– EcoRI-HF
– XbaI
– SpeI
– PstI
– 10X NEBuffer 2.1
– T4 DNA 连接酶
– 10X T4 DNA 连接酶缓冲液 

BioBrick® 组装试剂盒             货   号                  #E0546S

组装两种标准 BioBrick 过程。上游片段用 EcoRI-HF 和 SpeI 消化,下游片段用 XbaI 和 PstI 消化,目的质粒用 EcoRI-HF 和 PstI 消化。三个片段用 T4 连接酶连接并转化 E. coli。然后在带有目的质粒抗性的 LB 琼脂板上挑选出含有 BioBrick 的重组子。

Q5® 定点突变试剂盒(不含感受态细胞) 货 号 #E0552S-NEB酶试剂

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Q5® 定点突变试剂盒(不含感受态细胞)                              收藏

Q5®  定点突变试剂盒(不含感受态细胞)             货   号                  #E0552S

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相关产品

NEB PCR 克隆试剂盒
NEB PCR 克隆试剂盒(不含感受态细胞)
KLD 酶混合液

 

特性

 适用于各种模板,稳定、高效的引入突变,进行指数扩增
 Q5 超保真 DNA 聚合酶保真性极高,缩短筛选时间
 可室温建立反应
 使用常规引物,无需对寡核苷酸进行磷酸化或纯化
 方便使用的预混液剂型  

概述

Q5 定点突变试剂盒可以在 2 小时内快速对双链质粒 DNA 进行定点突变,该试剂盒使用稳定的 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶,结合客户自行设计的引物,在各种质粒中引入替换、缺失和插入突变。为保证效率,将产物转入试剂盒提供的高效级 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞,质粒长度可达 14.3 kb。  

应用

• 在质粒 DNA 上产生替换、插入、缺失突变  

Q5®  定点突变试剂盒(不含感受态细胞)             货   号                  #E0552S
图 1:Q5 定点突变试剂盒流程。该试剂盒可以快速、高效地对双链质粒 DNA 进行替换、缺失或插入突变。第一步是使用 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶进行指数扩增。第二步是包含激酶、连接酶和 DpnI 的特殊混合液处理,快速环化 PCR 产物和去除模板。第三步是高效转入化学感受态细胞。

Q5 定点突变试剂盒包含

– Q5 热启动超保真 Master Mix(2X)
– KLD 酶混合液(10X)和反应缓冲液(2X)
– 对照引物混合液(各 10 μM)和 DNA 模板(5 ng/μl)
– NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞(高效级)
– pUC19 转化对照质粒(5 pg/μl)
– SOC Outgrowth 培养基  

质保声明

Q5 定点突变试剂盒经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。   

Q5® 定点突变试剂盒 货 号 #E0554S-NEB酶试剂

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Q5® 定点突变试剂盒                              收藏

Q5®  定点突变试剂盒             货   号                  #E0554S

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NEB PCR 克隆试剂盒
NEB PCR 克隆试剂盒(不含感受态细胞)
KLD 酶混合液

 

特性

 适用于各种模板,稳定、高效的引入突变,进行指数扩增
 Q5 超保真 DNA 聚合酶保真性极高,缩短筛选时间
 可室温建立反应
 使用常规引物,无需对寡核苷酸进行磷酸化或纯化
 方便使用的预混液剂型 

概述

Q5 定点突变试剂盒可以在 2 小时内快速对双链质粒 DNA 进行定点突变,该试剂盒使用稳定的 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶,结合客户自行设计的引物,在各种质粒中引入替换、缺失和插入突变。为保证效率,将产物转入试剂盒提供的高效级 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞,质粒长度可达 14.3 kb。 

应用

• 在质粒 DNA 上产生替换、插入、缺失突变 

Q5®  定点突变试剂盒             货   号                  #E0554S

图 1:Q5 定点突变试剂盒流程。该试剂盒可以快速、高效地对双链质粒 DNA 进行替换、缺失或插入突变。第一步是使用 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶进行指数扩增。第二步是包含激酶、连接酶和 DpnI 的特殊混合液处理,快速环化 PCR 产物和去除模板。第三步是高效转入化学感受态细胞。

Q5 定点突变试剂盒包含

– Q5 热启动超保真 Master Mix(2X)
– KLD 酶混合液(10X)和反应缓冲液(2X)
– 对照引物混合液(各 10 μM)和 DNA 模板(5 ng/μl)
– NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞(高效级)
– pUC19 转化对照质粒(5 pg/μl)
– SOC Outgrowth 培养基 

质保声明

Q5 定点突变试剂盒经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。  

NEB® PCR 克隆试剂盒 货 号 #E1202S-NEB酶试剂

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NEB® PCR 克隆试剂盒                              收藏

NEB® PCR 克隆试剂盒             货   号                  #E1202S

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相关产品

NEB PCR 克隆试剂盒(无感受态细胞)

特性

 含 SP6 和 T7 启动子,便于体外转录
 克隆所有类型的 PCR 产物更为简单,包括平末端和 TA 末端
 克隆速度快,连接仅需 5 分钟
 筛选简单,几乎没有克隆背景,不需要蓝白斑筛选
 无需纯化步骤,节约时间
 两侧的限制性内切酶酶切位点方便亚克隆,包含两种单酶切选择
 BsaI 位点的除去以便 Golden Gate 克隆

概述

NEB PCR 试剂盒提供:优化的 2X 克隆预混液(其中配有独特的连接增强剂)和线性载体。该线性载体利用最新技术抑制背景菌落生长,使背景值降为最低。本试剂盒能简单、快速克隆各种 PCR 产物。具有校读功能的聚合酶产生平末端扩增子(如:Q5 或者 Phusion),无校对功能的聚合酶产生单碱基突出末端的扩增子(如 Taq、OneTaq、LongAmp Taq)。2X 克隆预混液中包含有末端修复成份,可在连接反应步骤前进行末端平齐化,因此,无论扩增子是何种末端都能完成有效连接。此外,使用本试剂盒,PCR 产物无需纯化,PCR 引物也无需经过 5´ -磷酸基修饰。 

• 提供下游菌落 PCR 或测序引物
• 试剂盒包含 1 kb 扩增子对照和线性载体及一次用量的大肠杆菌感受态细胞
• 比其它商业化产品保质期长(12 个月)

PCR 克隆试剂盒包含

– 克隆预混液
– 线性化 pMiniT™ 载体
– 对照扩增子
– 克隆检测正向引物
– 克隆检测反向引物
– NEB 10-beta E. coli 感受态细胞(克隆级)(仅在 NEB #E1202 提供) 

质保声明

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NEB® PCR 克隆试剂盒(含感受态细胞) 货 号 #E1203S-NEB酶试剂

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NEB® PCR 克隆试剂盒(含感受态细胞)                              收藏

NEB® PCR 克隆试剂盒(含感受态细胞)             货   号                  #E1203S

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相关产品

NEB PCR 克隆试剂盒

特性

 含 SP6 和 T7 启动子,便于体外转录
 克隆所有类型的 PCR 产物更为简单,包括平末端和 TA 末端
 克隆速度快,连接仅需 5 分钟
 筛选简单,几乎没有克隆背景,不需要蓝白斑筛选
 无需纯化步骤,节约时间
 两侧的限制性内切酶酶切位点方便亚克隆,包含两种单酶切选择
 BsaI 位点的除去以便 Golden Gate 克隆

概述

NEB PCR 试剂盒提供:优化的 2X 克隆预混液(其中配有独特的连接增强剂)和线性载体。该线性载体利用最新技术抑制背景菌落生长,使背景值降为最低。本试剂盒能简单、快速克隆各种 PCR 产物。具有校读功能的聚合酶产生平末端扩增子(如:Q5 或者 Phusion),无校对功能的聚合酶产生单碱基突出末端的扩增子(如 Taq、OneTaq、LongAmp Taq)。2X 克隆预混液中包含有末端修复成份,可在连接反应步骤前进行末端平齐化,因此,无论扩增子是何种末端都能完成有效连接。此外,使用本试剂盒,PCR 产物无需纯化,PCR 引物也无需经过 5´ -磷酸基修饰。 

• 提供下游菌落 PCR 或测序引物
• 试剂盒包含 1 kb 扩增子对照和线性载体及一次用量的大肠杆菌感受态细胞
• 比其它商业化产品保质期长(12 个月) 

PCR 克隆试剂盒包含

– 克隆预混液
– 线性化 pMiniT™ 载体
– 对照扩增子
– 克隆检测正向引物
– 克隆检测反向引物
– NEB 10-beta E. coli 感受态细胞(克隆级)(仅在 NEB #E1202 提供)  

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NEB Golden Gate 组装混合液(停产有替代) 货 号 #E1600S-NEB酶试剂

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NEB Golden Gate 组装混合液(停产有替代)                              收藏

NEB Golden Gate 组装混合液(停产有替代)             货   号                  #E1600S

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#E1600S
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停产通知

请注意:该产品已停产,库存售完为止,替代产品为 E1601。

特性

 无痕克隆 – 组装后无额外碱基存在
 可用于组装重复区
 兼容片段长度广(>15 kb 至 <100 bp)
 有效组装高 GC 区 

概述

Golden Gate 可高效、无痕的克隆组装 DNA片段。该方法起始于 1996 年,这是第一次使用IIS 型限制性内切酶和 T4 连接酶顺序或同时将多个目的基因插入到同一个载体骨架上。这类核酸内切酶产生用户确定的唯一的末端序列,该内切酶在识别位点之外进行切割。产生的 DNA突出末端与临近可连接的互补 DNA 末端退火。一旦组装上,结构中内切酶的识别位点已经不存在。因为每一个互补可连接的 4 碱基突出端都是钝端(内切酶识别位点已经不存在),目的组装产物随时间逐渐积累。该方法特别适用于多重组装实验,例如 TALEs (Transcription Activator
Like Effectors)和 TALENs(TALEs fused to a FokI nucleasecatalytic domain)。Golden Gate 方法也适用于单一目的基因的克隆实验。
 
NEB Golden Gate 组装混合液(停产有替代)             货   号                  #E1600S

NEB Golden Gate 组装混合液包含

– NEB Golden Gate 组装混合液
– Golden Gate 反应缓冲液(10X) 

质保声明

NEB Golden Gate 组装混合液经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请联系我们。  

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献,请联系我们。  

NEB Golden Gate 组装混合液(停产有替代)             货   号                  #E1600S

NEBNext RNA Mg++ 片段化模块 货 号 #E6150S-NEB酶试剂

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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于所有测序平台/模块和酶

NEBNext RNA Mg++ 片段化模块                              收藏

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#E6150S
200 次反应
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概述

The NEBNext® Magnesium RNA Fragmentation Module has been optimized to fragment RNA into small

pieces by incubation with Magnesium ions at 94˚C. Fragment size is controlled by incubation time (Figure 1), and the reaction is ended by the addition of NEBNext Fragmentation Stop Solution.

 

NEBNext RNA Mg++ 片段化模块            货   号                  #E6150S

随酶提供试剂

  NEBNext® RNA Fragmentation Buffer

  NEBNext RNA Fragmentation Stop Solution

NEBNext RNA 文库制备试剂 — 订购信息

NEBNext RNA Mg++ 片段化模块            货   号                  #E6150S

NEBNext RNA Mg++ 片段化模块            货   号                  #E6150S

NEBNext® 文库定量 DNA 标准品 货 号 #E7642S-NEB酶试剂

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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/文库定量

NEBNext® 文库定量 DNA 标准品                              收藏

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#E7642S
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相关产品

NEBNext® 文库定量试剂盒

产品特点

与 NEBNext® 文库定量试剂盒(Illumina®)中的标准样品相同,为补充试剂

基于四个或六个标准样品的 qPCR 法文库定量
 

概述

 NEBNext® 文库定量 DNA 标准品包含六个标准样品,与 NEBNext® 文库定量试剂盒(Illumina®)一起使用,可建立从 100 pM 到 0.001 pM 的标准曲线。该标准品可作为 NEB #E7630L 中所含标准曲线试剂的补充装。NEB #E7630 产品说明书中包含了使用四个或六个标准样品设置标准曲线的详细步骤说明,从而为实验流程增添了灵活性。相较于同类型文库定量试剂盒,NEBNext® 文库定量试剂盒(Illumina®)提供了更简化的操作流程,并减少了批间差。

NEBNext® 文库定量试剂盒(Illumina®)的典型扩增和标准曲线
 NEBNext® 文库定量 DNA 标准品            货   号                  #E7642S
 
图 A 是 NEBNext® 文库定量试剂盒(Illumina®)在 Bio-Rad CFX96 Touch 上的典型结果,图 B 是 NEBNext® 文库定量试剂盒(Illumina®)在 Applied Biosystems 7500 Fast real-time qPCR instrument 上的典型结果。图左显示的是扩增曲线,图右显示的是标准曲线。两个仪器都使用了默认设置。ABI 7500 快速分析包含 1X ROX(低浓度)和 ROX 标准化。
 

EnGen® 突变检测试剂盒 货 号 #E3321S-NEB酶试剂

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产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen® 突变检测试剂盒                              收藏

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#E3321S
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特性

· 基于 T7 核酸内切酶的基因编辑检测

概述

EnGen 基因编辑突变检测试剂盒为检测基因编辑效率提供一整套的试剂。试剂盒操作的第一步,首先使用
Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液从待测细胞中扩增出目的基因组的靶标区域(即通过 CRISPR/Cas9、
TALENs或 ZFN等方法进行了基因编辑的区域),经退火、延伸步骤后,形成异源双链 DNA。在扩增子池中经过多轮循环后,基因插入和缺失(Indels)等造成的突变得到富集。第二步,将退火后的 PCR 产物用 EnGen T7 核酸内切酶 I 进行切割。 EnGen T7 核酸内切酶 I 是一种结构特异性酶,可有效识别大于1个碱基的基因错配。当错配出现时,DNA 分子的两条链被切割从而形成较小的片段。分析片段图谱可以对基因编辑实验的效率进行评估。
 
EnGen 基因编辑突变检测试剂盒包含一组对照模板和引物预混液,可用作 PCR 反应及 T7 核酸内切酶 I 消化实验的对照。对照模板和引物预混液中含有 2 种对照质粒和 1 对对照引物。经 PCR 扩增、变性、退火后,部分会形成含有10个碱基的插入突变,此种异源双链 DNA 正是 T7 核酸内切酶 I 的底物,600 bp 的 DNA 会被切割成 200 bp 和 400 bp 的两个片段;而同源双链 DNA 则不被 T7 核酸内切酶 I 切割。通过琼脂糖凝胶电泳或片段分析设备可以非常方便的分辨出同源(野生型)和异源(突变)片段。
 
试剂盒的实验流程经过优化,通过 Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液扩增得到的 PCR 产物可以不经纯化而直接用 T7 核酸内切酶 I 进行消化。 异源双链DNA 分子只需 15 分钟就可以被完全切割,随后用蛋白酶 K 将反应终止。 此外, Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液还可以用于优化靶点扩增的实验 。
 
图1: 实验流程

EnGen® 突变检测试剂盒            货   号                  #E3321S

将引物设计在已完成基因编辑位点的两侧,PCR 产物变性、退火后会生成三种结构。其中一种结构能够被 T7 核酸内切酶 I 切割(多于1个碱基错配的双链 DNA),经电泳分离和片段分析后,估算出基因编辑效率。

Engen 突变检测试剂盒组分

– Q5 热启动超保真聚合酶 2X 预混液
– NEBuffer 2
– EnGen T7 核酸内切酶 I
– 对照模板和引物预混液
– 蛋白酶 K.,分子生物级
– Quick-Load® 紫色 2-Log DNA Ladder (0.1 – 10.0 kb)
– 紫色凝胶上样染料 6X,无 SDS

参考文献

 关于该酶特性和产品应用的参考文献,请联系我们。 www.neb.com 或 www.neb-china.com 查询。

EnGen® sgRNA 合成试剂盒,S. pyogenes 货 号 #E3322S-NEB酶试剂

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产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen® sgRNA 合成试剂盒,S. pyogenes                              收藏

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相关产品

紫色凝胶上样染料 6X
2-Log DNA Ladder(0.1-10.0kb)
低分子量 ssRNA Ladder
RNA 上样染料(2X)

特性:

一个小时甚至更短时间内快速合成微克级的 sgRNA
EnGen® sgRNA 合成试剂盒,S. pyogenes            货   号                  #E3322S
 

概述

EnGen sgRNA 合成试剂盒, S. pyogenes 能简单快速合成 sgRNA 。利用试剂盒提供的试剂和使用者自己设计的特异性 DNA 序列,单管反应 30 分钟就能获得大量 sgRNA 。
自然界中,S. pyogenes Cas9 的启动 2 种 RNA 有关。及 crRNA 和 trRNA。crRNA 又CRISPR RNA包含大约 20 个核苷酸,位于PAM (Protospacer Adjacent Motif)  NGG 序列的上游,与目标 DNA 反义链同源互补。另一种 tracrRNA  又称  transactivating crRNA tracrRNA 序列的一部分与 crRNA 互补,所形成的互补序列及二级结构可被 Cas9 识别。在实际操作中,将 tracrRNA  和 crRNA 的序列进行整合,形成一条长片段单链指导 RNA ( sgRNA)  , 并与 Cas 9 形成复合体,识别并切割目标 DNA。
在 EnGen 2X sgRNA 反应混合液中,含有能被 S. pyogenes Cas 9 识别并起支架作用的特异性序列,该序列的一部分能与使用者设计的目标特异序列部分重叠。退火形成互补链后由 DNA  聚合酶进行填充。最终生成用于转录的 dsDNA 模板。本试剂盒可在一个反应中完成 dsDNA 的合成及 RNA 转录,生成具有功能的 sgRNA。
 

实验流程:

 EnGen® sgRNA 合成试剂盒,S. pyogenes            货   号                  #E3322S

A.特异目标链包含三个部分,分别是 T7 启动子、~20 nt 目标特异性序列及与 S. pyogenes Cas9 识别支架序列互补的 14 nt 重叠区域(反应混合液中提供)。室温下,混合特异性目标链(或 EnGen sgRNA 调控序列)与 EnGen2X sgRNA 反应预混液(NTPs,dNTPs,S. pyogenes Cas9 识别支架序列)及 EnGen sgRNA 酶预混液(DNA 和 RNA 聚合酶)。B.在 37℃ 条件下,具有 14 nt 互补重叠区域的 2 个片段发生退火。C. DNA 聚合酶从 3´ 端开始延伸,形成一个双链 DNA 模板。D. RNA 聚合酶识别 T7 启动子及其下游的 dsDNA 并开始转录。最终形成的 sgRNA 包含目标特异片段、crRNA 和 tracrRNA。37℃ 条件下,单管反应 30 分钟即可完成所有步骤。

EnGen sgRNA 合成试剂盒,S. pyogenes 组分

– EnGen sgRNA 酶混合液
– EnGen 2X sgRNA 反应混合液,S. pyogenes
– DNase I (RNase-free)
– EnGen sgRNA control Oligo,S. pyogenes

参考文献

关于该酶特性和产品应用的参考文献,请联系我们。 www.neb.com 或 www.neb-china.com 查询。

EpiMark® N6-甲基化腺嘌呤富集试剂盒 货 号 #E1610S-NEB酶试剂

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产品资料 – RNA 试剂 – RNA 分离和检测

EpiMark® N6-甲基化腺嘌呤富集试剂盒                              收藏

EpiMark® N6-甲基化腺嘌呤富集试剂盒             货   号                  #E1610S

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#E1610S
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特性

 在免疫沉淀实验流程中富集经 m6A修饰的 RNA
 经富集的 RNA 可直接用于 NGS 或RT-qPCR

概述

 EpiMark® N6-甲基腺嘌呤富集试剂盒包含一个 N6-甲基腺苷(m6A)兔源单克隆抗体。试剂盒中含有2个对照 RNA,一个含有 m6A 修饰(Gaussia 荧光素酶),另一个不含 m6A 修饰 (Cypridina 荧光素酶)用于监测富集和消耗程度。其中,Gluc RNA 对照在转录过程中需 20% 的 m6ATP 和 80% 的 ATP。
该试剂盒可用在免疫沉淀实验流程中富集经 m6A 修饰的 RNA,可用于 NGS 或 RT-qPCR 等下游实验。在片段化的 RNA 样本中,经修饰的 RNA 可与 N6-甲基腺苷抗体结合,从而被于抗体结合的 Protein G 磁珠富集。再经多轮洗涤与纯化步骤后,富集的 RNA 洗脱于无核酸酶水中,可用于进一步的分析。

EpiMark N6-甲基化腺嘌呤富集试剂盒组分:

– N6-甲基腺苷抗体
– m6A 修饰的对照 RNA (100nM)
– 无修饰的对照 RNA(100 nM)

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。

N6-甲基腺苷抗体是由 Cell Signaling Technology, Inc.生产,由 New England Bio-labs, Inc. 销售。