GE Glutathione SepharoseHigh 蛋白填料

GE17527901 Glutathione Sepharose® High Performance, 25Ml, GST 标签蛋白纯化填料,产品简介:
产品品牌:GE
产品名称:GST 标签蛋白纯化填料
产品货号:17527901
产品规格:25Ml/100Ml
GE Glutathione SepharoseHigh 蛋白填料

GE17527901 Glutathione Sepharose® High Performance, 25Ml, GST 标签蛋白纯化填料

GE医疗生命科学部(GE Healthcare Lifesciences)隶属于通用电气(GE)医疗集团,我们的产品和技术主要应用于蛋白质科学、基因科学、药物研究开发、生物制药生产、体外诊断、法医学、环境监测、食品/药品/水质安全、医院、高校科研院所以及各行业基础实验室领域.

GE Glutathione SepharoseHigh 蛋白填料

GE17527901 Glutathione Sepharose® High Performance, 25Ml, GST 标签蛋白纯化填料,产品简介:

产品品牌:GE

产品名称:GST 标签蛋白纯化填料

英文名称:Glutathione Sepharose® High Performance

产品货号:17527901

产品规格:25Ml/100Ml

GE17527901 Glutathione Sepharose® High Performance, 25Ml, GST 标签蛋白纯化填料,产品说明:

谷胱甘肽琼脂糖® 高效液相色谱法是一种高分辨率纯化谷胱甘肽S转移酶(GST)标记蛋白的亲和介质。

谷胱甘肽琼脂糖® 高效液相色谱法用于从细菌裂解物和其他S-转移酶或谷胱甘肽依赖性蛋白中纯化GST标记蛋白。GST标记的蛋白质在温和的非变性条件下用还原型谷胱甘肽洗脱。纯化过程保持了蛋白质的抗原性和功能。

GE17527901 Glutathione Sepharose® High Performance, 25Ml, GST 标签蛋白纯化填料,产品特点和优点:

• 34 μm珠子尺寸可提高效率和分辨率

•快速、一步纯化GST标记的蛋白质和其他谷胱甘肽S-转移酶或谷胱甘肽依赖性蛋白质

•纯化过程中的温和条件可保持蛋白质抗原性和功能

储存和稳定性

储存在4点到30点°C(20%乙醇)

GST 标签蛋白纯化填料

货号

产品

包装

平均颗粒大小(μm)

每毫升结合量

应用

pH 稳定性工作[清洗]

最高流速(cm/h)

17527901

Glutathione

25 ml

34

>7 mg GST融合蛋白

含谷胱甘肽S- 转移酶的重组融合蛋白或依赖S-转移酶或谷胱甘肽的蛋白

3-12

600

17527902

Sepharose HP

100 ml

 

[3-12]

 

17513201

Glutathione

25 ml

90

>10 mg GST融合蛋白

含谷胱甘肽S- 转移酶的重组融合蛋白或依赖S-转移酶或谷胱甘肽的蛋白

3-12

450

17513202

Sepharose4FF

100 ml

 

[3-12]

 

17513203

 

500ml

 

 

 

 

17075601

Glutathione

10 ml

90

>25 mg GST融合蛋白

含谷胱甘肽S- 转移酶的重组融合蛋白或依赖S-转移酶或谷胱甘肽的蛋白

4-13

450

17075605

Sepharose4B

100ml

 

[4-13]

 

17075604

 

500ml

 

 

 

 

GE Glutathione SepharoseHigh 蛋白填料

胰蛋白胨 oxoid胰蛋白胨

上海金畔生物常年供应“ 胰蛋白胨 oxoid胰蛋白胨”

胰蛋白胨 oxoid胰蛋白胨

 Tryptone
  胰蛋白胨
   产品编号 规    格 价    格 产  地 
   LP0042   500g 580.00   Oxoid

说明: 酪蛋白胰酶水解产物。
CAS#: 73049-73-7
外观: 米黄色粉末
储存条件: 室温避光干燥保存

 

 

    三糖铁琼脂(TSI)  Triple Sugar Iron Agar
产品编号 规    格 价    格
三糖铁琼脂(TSI)  Triple Sugar Iron Agar-250  250g  140.00
说明:生化培养基。 用于中沙门氏菌的鉴定;肠杆菌科细菌的生化反应筛选。
储存条件: 室温阴凉干燥保存

 

沙氏琼脂培养基  Sabouraud’s Agar Medium

产品编号 规    格 价    格
沙氏琼脂培养基  Sabouraud’s Agar Medium-250  250g  150.00
说明: 用于真菌的分离培养。
储存条件: 室温

用途:用于霉菌、酵母菌的培养。

 

 

配方:(g/L)

葡萄糖40g

酪蛋白胰酶消化物、动物组织的胃酶消化物等量混合10g 

琼脂15g

pH值5.6± 0.2

用法:

称取本品65 克,加入1000ml蒸馏水中,加热煮沸溶解,分装,115℃高压灭菌15分钟备用。

技术标准:

  • 本品参照GB/T16294-2010标准配方配制;
  • 用标准菌株检验符合质控标准。

上海金畔生物科技有限公司常年供应常规试剂生化试剂抗体和耗材,合作的试剂品牌sigma、amresco、abcam、CST、Roche、qiagen、invitrogen、omega以及耗材品牌corning、axygen、nunc、Thermo等

 

 

多价蛋白胨 Polypetone

产品编号 规    格 价    格
 

多价蛋白胨 Polypetone -250 250g   90.00
多价蛋白胨 Polypetone说明: 由多种蛋白胨混合而成,富含各种分子量的肽,常用于培
          养要求高的微生物。
多价蛋白胨 Polypetone储存条件: 室温干燥保存

 

多价蛋白胨 Polypetone

上海金畔生物常年供应“多价蛋白胨 Polypetone”

多价蛋白胨 Polypetone

 

 

上海金畔生物科技有限公司常年供应常规试剂生化试剂抗体和耗材,合作的试剂品牌sigma、amresco、abcam、CST、Roche、qiagen、invitrogen、omega以及耗材品牌corning、axygen、nunc、Thermo等

 

 

多价蛋白胨 Polypetone

产品编号 规    格 价    格
 

-250 250g   90.00
说明: 由多种蛋白胨混合而成,富含各种分子量的肽,常用于培
          养要求高的微生物。
储存条件: 室温干燥保存 

蛋白胨 Peptone

上海金畔生物常年供应“蛋白胨 Peptone”

蛋白胨  Peptone

    Peptone 蛋白胨
产品编号 规    格 价    格

 

上海金畔生物科技有限公司常年供应常规试剂生化试剂抗体和耗材,合作的试剂品牌sigma、amresco、abcam、CST、Roche、qiagen、invitrogen、omega以及耗材品牌corning、axygen、nunc、Thermo等

 

 

蛋白胨  Peptone-250 250g  80.00
 

蛋白胨  Peptone说明: 微生物培养用。
 

蛋白胨  Peptone储存条件: 室温

牛肉蛋白胨 Peptone Beef

上海金畔生物常年供应“牛肉蛋白胨 Peptone Beef”

牛肉蛋白胨 Peptone Beef

   牛肉蛋白胨 Peptone Beef
产品编号 规    格 价    格
牛肉蛋白胨-500  500g  180.00
   牛肉蛋白胨 Peptone Beef说明: 本品系用新鲜牛肉胰酶水解制成,呈淡黄色粉末,有肉香味。
   牛肉蛋白胨 Peptone Beef储存条件: 室温

 

上海金畔生物科技有限公司常年供应常规试剂生化试剂抗体和耗材,合作的试剂品牌sigma、amresco、abcam、CST、Roche、qiagen、invitrogen、omega以及耗材品牌corning、axygen、nunc、Thermo等

 

黏蛋白染色液(温和甲基化法) D7860 染色及显色类

黏蛋白染色液(温和甲基化法) Jinpan D7860 染色及显色类
产品名称:黏蛋白染色液(温和甲基化法)
品牌:Jinpan
货号:D7860
规格:2×50ml
储存条件: 4℃,避光,6个月
用途: 区分黏蛋白中酸性基团:羧基和硫酸根
注意事项:酸性甲醇与阿利新蓝联合使用,碳水化合物含有羧基呈阴性,出现任何着色则意味着含有硫酸根。
货期:现货

黏蛋白染色液(温和甲基化法) Jinpan D7860 染色及显色类 2×50ml

 

上海金畔生物科技有限公司供应黏蛋白染色液(温和甲基化法) Jinpan D7860 染色及显色类;现货供应黏蛋白染色液(温和甲基化法) Jinpan D7860 染色及显色类量大优惠,咨询

 

黏蛋白染色液(温和甲基化法) Jinpan D7860

产品名称:黏蛋白染色液(温和甲基化法)

品牌:Jinpan

货号:D7860

规格:2×50ml

储存条件: 4℃,避光,6个月

用途: 区分黏蛋白中酸性基团:羧基和硫酸根

注意事项:酸性甲醇与阿利新蓝联合使用,碳水化合物含有羧基呈阴性,出现任何着色则意味着含有硫酸根。

货期:现货

需详细资料的请客服

SDS-PAGE蛋白电泳套装

本公司提供的蛋白电泳套装包含凝胶制备,蛋白上样缓冲液及蛋白电泳上样缓冲液。
本公司生产的SDS-PAGE蛋白电泳套装是按照经典方法配制而成。本套装根据电泳体系的大小,可进行约50次左右。

 

SDS-PAGE蛋白电泳套装

P0400      SDS-PAGE蛋白电泳套装 Jinpan 50T     460.00

本公司供应化学试剂的SDS-PAGE蛋白电泳套装,品质保证,欢迎洽谈。

 

名称

规格

保存条件

5×蛋白上样缓冲液(含DTT

1ml

-20

Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液

一包(10L

RT

30%丙烯酰胺(29:1)

100mlX2

2-8

1.5mol/LTris(pH8.8)

100mlX2

RT

1.0mol/LTris(pH6.8)

60ml

RT

过硫酸铵干粉

2g

RT

10%SDS

10ml

RT

TEMED

1.5ml

RT

说明书

一份

一份

产品简介

本公司提供的蛋白电泳套装包含凝胶制备,蛋白上样缓冲液及蛋白电泳上样缓冲液。

本公司生产的SDS-PAGE蛋白电泳套装是按照经典方法配制而成。本套装根据电泳体系的大小,可进行约50次左右。

使用说明:

一,前期工作:蛋白提取及定量。

二,蛋白上样液的制备:蛋白上样缓冲液解冻,轻轻混匀,按4体积蛋白样品加入一体积的5×蛋白上样缓冲液,混匀,沸水中水浴5分钟。

三,电泳液的配制:将一包电泳液干粉全部倒入1L2L的烧柄中,加一定量的水溶解成2L配成5×Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液,用前再稀释5倍或者先配成1L成为10×Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液,用前再稀释10倍。

四,10-151.5ml离心管,将过硫酸铵干粉分装成100mg/支,标记好备用。

五,凝胶制备:

1取一支称好的100mg过硫酸铵干粉,加入1ml蒸馏水,混匀,此配好的10%过硫酸铵溶液2-8度可保存一周,一周后请用新的。洗干净电泳玻璃板,夹好。

2根据目标蛋白分子量大小,选取凝胶浓度,按下表配制。先配分离胶,再配浓缩胶。

 

 

分离胶15%

分离胶12%

分离胶10%

分离胶8%

浓缩胶(5%)

总体积

10ml

10ml

10ml

10ml

5ml

30%丙烯酰胺(29:1)

5ml

4ml

3.3ml

2.7ml

0.83ml

1M Tris-HCL (PH6.8)

0

0

0

0

0.625ml

1.5M Tris-HCL(PH8.8)

2.5ml

2.5ml

2.5ml

2.5ml

0

10%SDS

100ul

100ul

100ul

100ul

50ul

ddH2O

2.3ml

3.3ml

4.0ml

4.6ml

3.42ml

10%过硫酸铵

100ul

100ul

100ul

100ul

75ul

TEMED

10ul

10ul

10ul

10ul

7.5ul

注意:

1TEMED10%过硫酸铵zui后加,在加入前需混匀前面所加试剂。10%过硫酸铵在4℃有效期为一周,TEMED易挥发,使用后请盖紧瓶盖。在常温下胶30分钟内可以凝固,如温度过低,可放37℃温箱凝固。灌完分离胶后,轻轻的加1ml ddH2O封上层,胶凝固后可见到分界线。灌浓缩胶前,先倾去水层,再用吸纸吸干。浓缩胶灌好后立刻插入梳子。浓缩胶凝固后,放入电泳液中让电泳液漫过加样孔,轻轻的拨出梳子,可防加样孔变形。

2,配制量可按上表等比加减。如果所用胶浓度与上面不同,可自行调整,主要是调整30%丙烯酰胺的量(需要浓度×总体积/30%),zui后用水补足总体积。

六,上样,电泳,一般是浓缩胶80V,分离胶120V恒压,等溴酚兰电泳到合适的位置,结束电泳,染色或者进行下一步实验。

 

货号

产品名称

品牌

规格

价格(元)

P0330

20×TBS

Jinpan

500ml

100.00

P0400

SDS-PAGE蛋白电泳套装

Jinpan

50T

460.00

P0340

TBST(TBS-T)

Jinpan

500ml

60.00

P0370

膜封闭液

Jinpan

100ml

50.00

P0380

膜再生液

Jinpan

100ml/500ml

60.00/180.00

 

Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液

金畔生物常年供应Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液(干粉),生化试剂供应商(干粉),分子生物学试剂(干粉)

 

P0200 蛋白电泳 Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液(干粉) 10L 180

Tris-甘氨酸电泳缓冲夜 配制量:10升

所用试剂:Tris碱,甘氨酸和 SDS

含量配方:    30.3      Tris碱

        188g        甘氨酸

    10g         SDS

此产品为干粉混合物。用时可以用双蒸水溶解成1L,配成10倍浓缩液,用时再稀释10倍。

配好的电泳液用于SDS-PAGE蛋白电泳。可反复使用三到五次,如果发现有明显沉淀或者漂浮时,请丢弃换新的。

Tris-甘氨酸电泳缓冲夜系列产品 一起采购节约时间!

 

P0300 蛋白电泳 1.5M Tris-HCL(PH8.8) 100/500ml 46.00/160.00
P0220 蛋白电泳 10%过硫酸氨 1ml 15.00
P0210 蛋白电泳 10×电泳转移缓冲液 500ml 100.00
P0270 蛋白电泳 10×丽春红染液 10ml 90.00
P0290 蛋白电泳 1M Tris-HCL (PH6.8) 100/500ml 40.00/160.00
P0230 蛋白电泳 30%丙烯酰胺/甲叉溶液(29:1) 100ml/500ml 60.00/180.00
P0250 蛋白电泳 4×SDS-PAGE分离胶缓冲液 100ml/500ml 60.00/180.00
P0260 蛋白电泳 4×SDS-PAGE浓缩胶缓冲液 100/500ml 60.00/180.00
P0235 蛋白电泳 40%丙烯酰胺/甲叉溶液(37.5:1) 100/500ml 80.00/280.00
P0180 蛋白电泳 5×蛋白上样缓冲液(含DTT) 1ml/10ml 40.00/160.00
P0170 蛋白电泳 5×蛋白上样缓冲液(配有β-巯基乙醇) 10ml 120
P0190 蛋白电泳 5×非变性蛋白上样缓冲液 10ml 100.00
P0171 蛋白电泳 4×蛋白上样缓冲液(配有β-巯基乙醇) 10ml 100
P0200 蛋白电泳 Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液(干粉) 10L 180
P0280 蛋白电泳 考马斯亮蓝快速染色液 500ml 100.00
P1006 蛋白电泳 载体两性电解质PH3.5-10 12ml 580.00

 

卵清蛋白 9006-59-1

说明:生化研究;澄清剂;胶粘剂;胶体保护剂。
别名:Albumin from hen egg white ;Ovalbumin.
分子量:44287Da
CAS#:9006-59-1
外观:类白色冻干粉
特性:氮:≥12.5%
琼脂糖凝胶电泳检测:62~88%卵清蛋白
储存条件:2-8℃

上海金畔生物科技有限公司供应卵清蛋白 9006-59-1;现货供应卵清蛋白9006-59-1量大优惠,咨询

 

说明:生化研究;澄清剂;胶粘剂;胶体保护剂。

别名:Albumin from hen egg white ;Ovalbumin.

分子量:44287Da

CAS#:9006-59-1

外观:类白色冻干粉

特性:氮:≥12.5%

琼脂糖凝胶电泳检测:62~88%卵清蛋白

储存条件:2-8℃ 

    

OXOID 胰蛋白胨 LP0042

上海金畔生物科技有限公司供应OXOID 胰蛋白胨 LP0042现货供应OXOID胰蛋白胨 LP0042

量大优惠,咨询

上海金畔生物科技有限公司供应OXOID 胰蛋白胨 LP0042现货供应OXOID胰蛋白胨 LP0042

量大优惠,咨询 

产品编号 : LP0042                                                                                                                          

规格  500g

     Oxoid

说明: 酪蛋白胰酶水解产物。

外观: 米黄色粉末
储存条件: 室温避光干燥保存

 

oxoid胰蛋白胨成分分析:

总氮:13.3%

氨氮:3.7%

氯化钠:0.4%

PH2%溶液):7.3% 

卵清蛋白;北京供应卵清蛋白 9006-59-1

上海金畔生物科技有限公司供应卵清蛋白 9006-59-1量大优惠,咨询 :

           

 

 

 

 

上海金畔生物科技有限公司供应卵清蛋白 9006-59-1量大优惠,咨询 :      12158781

 

 

说明:生化研究;澄清剂;胶粘剂;胶体保护剂。

别名:Albumin from hen egg white ;Ovalbumin.

分子量:44287Da

CAS#:9006-59-1

外观:类白色冻干粉

特性:氮:≥12.5

           琼脂糖凝胶电泳检测:6288%卵清蛋白

储存条件:2-8      

 

 

卵清蛋白 9006-59-1;北京供应卵清蛋白 9006-59-1

上海金畔生物科技有限公司供应卵清蛋白 9006-59-1量大优惠,咨询 :

 

 

卵清蛋白 9006-59-1

 

 

 

 

 

上海金畔生物科技有限公司供应卵清蛋白 9006-59-1量大优惠,咨询 :      12158781

 

 

说明:微生物及组织培养基;药物检定;白蛋白衍生物制备;酶

           的释放激活及稳定剂;蛋白质标准;荧光免疫检定技术的    

           稀释剂及稳定剂。

别名:牛血清白蛋白第五部分;牛白朊第五部分

           Bovine albumin fraction;Bovine serum albumin fraction

分子量:68 Kd

外观:类白色冻干粉

特性:纯度(蛋白质):≥95%,水≤5%;均一化电泳检测

杂质:Na<0.5%                 K<0.006%

           Li<0.0003%            Ca: <0.02%

           Mg: <0.003%             重金属 Pb)<0.003%

           Fe <0.001%            Pi<0.002%

           葡萄糖:<0.05%        甘油:<0.005%

           L-乳酸盐:<0.025%

储存条件:2-8

细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 P0914

上海金畔生物科技有限公司供应细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 Jinpan P0914量大优惠,咨询 :

 

 

 

上海金畔生物科技有限公司供应细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 Jinpan P0914量大优惠,咨询 :      2743691513

 

产品简介:

产品编号

产品名称

产品包装

产品价格

P0914

细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒

50

420.00

P0914

细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒

200

980.00

 

 

1、在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份,而研究得zui多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白,不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位,而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究,例如EMSA(也称gelshift),footprinting等。
    细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白可以用于Western,EMSA,footprinting,报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
    本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B,在低渗透压条件下,使细胞充分膨胀,然后破坏细胞膜,释放出细胞浆蛋白,然后通过离心得到细胞核沉淀。zui后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
    本试剂盒可以抽提50个样品,如果每个样品的数量为约二百万细胞或约60毫克组织。
包装清单:

产品编号

产品名称

包装50T

包装200T

P0914-1

细胞浆蛋白抽提试剂A

10ml

40ml

P0914-2

细胞浆蛋白抽提试剂B

0.5ml

2.0ml

P0914-3

细胞核蛋白抽提试剂

2.5ml

10ml

 

PMSF(100mM)

1.5ml

1.5ml

 

说明书

1

1

2、 
保存条件:
    -20℃保存,一年有效。
注意事项:
    PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入,以免PMSF在水溶液中很快失效。
    抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
    本试剂盒对于组织样品,仅适合于新鲜组织,对冻存过的组织抽提效果很差。可以抽提的组织样品数通常不足100个。
    使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

3、 使用说明:
1. 准备溶液:温融解试剂盒中的三种试剂,溶解后立即放置在冰上,混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A备用,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zui终浓度为1mM。取适当量的细胞核蛋白抽提试剂备用,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zui终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞:用PBS洗一遍,用细胞刮子刮下细胞,或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧,并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞,尽zui大努力吸尽上清,留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞,以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 对于悬浮细胞:用PBS洗一遍,离心收集细胞,尽zui大努力吸尽上清,留下细胞沉淀备用。
4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。(对于二百万Hela细胞,其细胞沉淀的体积大约为20微升或40毫克。)
5. zui高速剧烈Vortex 5秒,把细胞沉淀*悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有*悬浮并分散开,可以适当延长vortex时间。)
6. 冰浴10-15分钟。
7. 加入细胞浆蛋白抽提试剂B 10微升。zui高速剧烈Vortex 5秒,冰浴1分钟。
8. zui高速剧烈Vortex 5秒,4℃ 12,000-16,000g离心5分钟。
9. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中,即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用,也可以冻存。(千万不要触及沉淀,可以在沉淀上方保留极小体积的上清,以免触及沉淀。)
10. 对于沉淀,*吸尽残余的上清,加入50微升添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。(不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染。)
11. zui高速剧烈Vortex 15-30秒,把细胞沉淀*悬浮并分散开。然后放回冰浴中,每隔1-2分钟再高速剧烈Vortex 15-30秒,共30分钟。
12. 4℃ 12,000-16,000g离心10分钟。
13. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中,即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用,也可以-70℃冻存。
14. 对于新鲜组织:
    A. 把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A和B(例如200微升细胞浆蛋白抽提试剂A中加入10微升抽提试剂B)。并加入PMSF至zui终浓度为1mM配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200微升组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液,并在玻璃匀浆器内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。
    B. 匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内,冰浴放置15分钟。
    C. 4℃ 1,500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中,为抽提得到的部分细胞浆蛋白。(吸上清时千万不要触及沉淀。)
    D. 对于沉淀,到了这一步已经充分匀浆,但很多细胞还没有破碎。接下去按照使用说明的步骤4开始操作,即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作,按照步骤4至步骤13抽提得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤14C中抽提得到的细胞浆蛋白合并。

 

酵母蛋白小量提取试剂盒 P1140

上海金畔生物科技有限公司供应酵母蛋白小量提取试剂盒 Jinpan P1140量大优惠,咨询 :

 

酵母蛋白小量提取试剂盒 Jinpan P1140

上海金畔生物科技有限公司供应酵母蛋白小量提取试剂盒 Jinpan P1140量大优惠,咨询 :      2743691513

 

酵母蛋白小量提取试剂盒

一,试剂盒组份

组份

 (50T)

 (100T)

酵母裂解液

50mL

100mL

玻璃珠

3g

6g

PMSF(100X)

1ml

1ml

β-巯基乙醇

1ml

1ml

二,说明

酵母蛋白小量提取试剂盒用于从酵母细胞中分提取可溶性各种蛋白。提取的蛋白可用于各种常规实验。如PAGEWestern,免疫沉淀(immunol precipitationIP)和免疫共沉淀(co-IP)。酵母裂解液中不含任何去污剂,可用各种方法测定蛋白含量。

三,操作步骤

1.   酵母常规培养。

2.   离心收集酵母。大概50100ul的积压体积。*弃上清。

3.   加入酵母裂解液,吹打重重悬。再次离心,弃上清(此步的目的是将酵母洗一下,也可以省掉此步)。

4.   在酵母菌中,再加入0.5ml裂解液,加入5ul PMSF5ulβ巯基乙醇(在通风处操作)。加入50mg左右的玻璃珠,预冷,涡流10min(每涡流1min,可以冰上冷却1min)。

5.   离心,取上清。进行下一步实验或者-70储存。

四,注意事项

1,不同的酵母可能须涡流时间不同,可根据实际情况延长或者缩短时间。(比如蛋白浓度高低,蛋白降解情况等。)

2,如果一个月内能够用完,可将β巯基乙醇按照百分之一的量一次性全部加入酵母裂解液中。28度保存。

3,因为是采用物理方法破解酵母壁,所以对于酶等一些易失活蛋白可能并不适合。

4,为了你的实验安全,请戴手套操作。并注意通风。

 

Lowry法蛋白浓度测定试剂盒 P0040

上海金畔生物科技有限公司供应1、Lowry法蛋白浓度测定试剂盒 Jinpan P0040量大优惠,咨询 :

 

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Lowry法蛋白浓度测定试剂盒
          

 

试剂盒组成

包装(1000微孔

保存

Folin酚甲试剂A

100ml×2

2-8

Folin酚甲试剂B

5ml

2-8

Folin酚乙试剂(1N)

20ml

2-8

PBS稀释液

30ml

2-8

BSA蛋白标准 (5mg/ml BSA)

1ml

-20

本试剂盒自订购之日起一年内有效。本试剂盒用于酶标板或者200ul比色皿时可做1000孔。当使用2ml比色皿时可做100孔,如果是1ml比色皿时可做200孔。

产品简介

Folin-酚试剂法包括两步反应:*步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质铜络合物;第二步是此络合物将Folin试剂还原,产生深蓝色,颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为5100μg/ml蛋白质。Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外,不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。

使用说明

一,酶标仪法

1.         根据需要量,将Folin酚甲试剂AFolin酚甲试剂B501混合,其有效期为24小时,过期失效。

2.         稀释标准品:取10微升BSA标准品用PBS稀释至100微升(标准品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0, 2, 468, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中,加PBS补足到20微升。

3.         将样品作适当稀释(多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

4.         将配好的Folin酚甲试剂每孔加入200微升,轻轻震动,混匀,室温放置10分钟。

5.         各孔加入20微升Folin酚乙试剂,迅速混匀,37℃放置30分钟。用酶标仪测定A650,根据标准曲线计算出蛋白浓度。

6.         使用温箱孵育时,应注意防止因水粉蒸发影响检测结果。

二,分光光度计法

如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。步骤如下:

1. 根据需要量,将Folin酚甲试剂AFolin酚甲试剂B501混合,其有效期为24小时,过期失效。

2. 稀释标准品:取10微升BSA标准品用PBS稀释至100微升(标准品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/ml

3. 取八支(或者更多)5ml离心管,标让号,按下表加入试剂。

 

离心管号

1

2

3

4

5

6

7(样品管1

8(样品管2

9(样品管3

标准蛋白BSA

0

40ul

80ul

120ul

160ul

200ul

200ul适当稀释的样品1

200ul适当稀释的样品2

……

PBS

200ul

160ul

120ul

80ul

40ul

0

0

0

0

Folin酚甲试剂

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

混匀,室温放置10分钟

Folin酚乙试剂

200ul

200ul

200ul

200ul

200ul

200ul

200ul

200ul

200ul

4.混匀,37℃放置30分钟。用分光光度计测定A650

 

 

Bradford蛋白浓度测定试剂盒 P0020

上海金畔生物科技有限公司供应Bradford蛋白浓度测定试剂盒 Jinpan P0020量大优惠,咨询 :

Bradford蛋白浓度测定试剂盒 Jinpan P0020

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 Bradford蛋白浓度测定试剂盒
组成 包装(2500微孔) 保存
5×G250染色液 100ml 2-8℃
PBS稀释液 30ml 2-8℃
蛋白标准(5mg/ml BSA) 1ml -20℃
 
本试剂盒自订购之日起九个月内有效。本试剂盒用于酶标板或者200ul比色皿时可做2500孔。当使用2ml比色皿时可做250孔,如果是1ml比色皿时可做500孔。

产品简介:

考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的zui大吸收峰的位置(lmax),由465nm变为595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。

操作说明:

一,微孔酶标仪法

1.        *溶解蛋白标准品,取10ml,加240ulPBS稀释至250ml ,使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。

2.        5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取1ml  5×G250染色液,加入4ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。

3.        将标准品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中,加PBS稀释液补足到20微升。

4.        将样品作适当稀释(多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

5.        各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液,室温放置3-5分钟。

6.        用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。

7.        根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

    

二,分光光度计法

如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。

步骤如下:

1,取八支(或者更多)干净的10ml离心管,标记上号。

2,取100ulBSA,加PBS2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。

3,5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取10ml  5×G250染色液,加入40ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。

4,按下表加入试剂(以每孔5ml计,多余的用来润洗比色皿)

离心管号 1 2 3 4 5 6 7(样品管1) 8(样品管2) 9(样品管3)
标准蛋白BSA 0 100ul 200ul 300ul 400ul 500ul 500ul适当稀释的样品1 500ul适当稀释的样品2 ……
PBS 500ul 400ul 300ul 200ul 100ul 0 0 0 0
1×G250染色液 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml
 
5,反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性,可每间隔2分钟加一管染色液,每间隔2分钟测一管OD值。如下表。

离心管号 1 2 3 4 5 6 7 8 ……
加染色液(分钟) 0 2 4 6 8 10 12 14 ……
测OD值 3 5 7 9 11 13 15 17 ……

BCA蛋白浓度测定试剂盒 P0030

上海金畔生物科技有限公司供应BCA蛋白浓度测定试剂盒 Jinpan P0030量大优惠,咨询 :

BCA蛋白浓度测定试剂盒 Jinpan P0030

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BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明

试剂盒组成 包装(500微孔) 保存
 
BCA试剂 100ml 2-8℃
Cu试剂 3ml 2-8℃
PBS稀释液 30ml 2-8℃
BSA蛋白标准 (5mg/ml BSA) 1ml  -20℃
 
 本试剂盒自订购之日起一年内有效。本试剂盒用于酶标板或者200ul比色皿时可做500孔。当使用2ml比色皿时可做50孔,如果是1ml比色皿时可做100孔。

产品简介

碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

使用说明

一,微孔酶标仪法

1.         配制工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。

2.         稀释标准品:取10微升BSA标准品用PBS稀释至100微升(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0, 2, 4,6,8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中,加PBS补足到20微升。

3.         将样品作适当稀释(多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

4.         各孔加入200微升BCA工作液,37℃放置15-30分钟。用酶标仪测定A562nm,根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

  

二,分光光度计法、

如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。

步骤如下:

1.配制工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。

2,  稀释标准品:取100微升BSA标准品用PBS稀释至1ml(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/ml。

3,  取八支(或者更多)5ml离心管,标让号,按下表加入试剂。

离心管号 1 2 3 4 5 6 7(样品管1) 8(样品管2) 9(样品管3)
标准蛋白BSA 0 40ul 80ul 120ul 160ul 200ul 200ul适当稀释的样品1 200ul适当稀释的样品2 ……
PBS 200ul 160ul 120ul 80ul 40ul 0 0 0 0
BCA工作液 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
4,  37℃放置15-30分钟。用分光光度计测562nm处吸光值,根据标准曲线计算出蛋白浓度。

Qiagen 30210 6His蛋白纯化柱料;贵阳供应Qiagen 30210 6His蛋白纯化柱

上海金畔生物科技有限公司供应Qiagen 30210 6His蛋白纯化柱料量大优惠,咨询 :

Qiagen 30210 6His蛋白纯化柱料

上海金畔生物科技有限公司供应Qiagen 30210 6His蛋白纯化柱料量大优惠,咨询 :

Qiagen 30210 6His蛋白纯化柱料高通量纯化血液或无细胞体液中的总DNA,包括基因组DNA,线粒体DNA,病毒DNA,zui高可达60 μg总DNA

快速纯化高品质,即用型DNA
无有机提取或乙醇沉淀
持续的高产量
*去除污染物和下游反应抑制物
 
Qiagen 30210 6His蛋白纯化柱料用于处理多至200 μl 的人全血, midi kits 处理量为0.3-2 ml,maxi kits为3-10 ml。QIAamp Mini、Midi 和Maxi离心管可在离心机或真空底座上制备样品。QIAamp DNA Blood Mini Kit 可在QIAcube上全自动进行DNA纯化。
 
 
Qiagen 30210 6His蛋白纯化柱料
Qiagen 28306 QIAquick Nucleotide Removal Kit (250) 从酶促反应物中回收纯化  
Qiagen 28304 QIAquick Nucleotide Removal Kit (50) 从酶促反应物中回收纯化  
Qiagen 28704 QIAquick Gel Extraction Kit (50) 胶回收试剂盒  
Qiagen 28706 QIAquick Gel Extraction Kit (250) 胶回收试剂盒  
Qiagen 30210 Ni-NTA Agarose (25 ml) 6His蛋白纯化柱料  
Qiagen 51104 QIAamp DNA Blood Mini Kit (50) 血液DNA提取试剂盒  
Qiagen 51106 QIAamp DNA Blood Mini Kit (250) 血液DNA提取试剂盒  
Qiagen 51183 QIAamp DNA Blood Midi Kit (20) 血液DNA提取试剂盒  
Qiagen 51185 QIAamp DNA Blood Midi Kit (100) 血液中提试剂盒  
Qiagen 51304 QIAamp DNA Mini Kit (50) 人类组织和细胞DNA提取试剂盒  
Qiagen 51306 QIAamp DNA Mini Kit (250) 人类组织和细胞DNA提取试剂盒  
Qiagen 52304 QIAamp RNA Blood Mini Kit (50) 新鲜全血样本胞内RNA的分离纯化  
Qiagen 52904 QIAamp Viral RNA Mini Kit (50) RNA病毒提取试剂盒  
Qiagen 52906 QIAamp Viral RNA Mini Kit (250) RNA病毒提取试剂盒  
Qiagen 56404 QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (50) 从石蜡包埋组织中纯化DNA试剂盒  
Qiagen 59104 EpiTect Bisulfite Kit (48) 甲基化转化试剂盒  
Qiagen 69104 DNeasy Plant Mini Kit (50) 从植物细胞和组织或真菌样本中纯化总DNA  
Qiagen 69504 DNeasy Blood & Tissue Kit (50) 血液,组织DNA提取试剂盒  
Qiagen 69506 DNeasy Blood & Tissue Kit (250) 血液,组织DNA提取试剂盒  
Qiagen Qiagen 70022 Oligotex mRNA Mini Kit (12) 从总RNA、细胞核组织中纯化及体外转录产物回收

Wako,蛋白胨多聚HIPOLYPEPTON

392-02115,蛋白胨多聚蛋白胨HIPOLYPEPTON产品简介:
产品品牌:Wako
产品名称:蛋白胨多聚蛋白胨HIPOLYPEPTON
产品货号:392-02115
产品规格:500g
富士胶片和光,蛋白胨多聚HIPOLYPEPTON

392-02115,蛋白胨多聚蛋白胨HIPOLYPEPTON

392-02115,蛋白胨多聚蛋白胨HIPOLYPEPTON产品简介:

产品品牌:Wako

产品名称:蛋白胨多聚蛋白胨HIPOLYPEPTON

产品货号:392-02115

产品规格:500g

Wako,蛋白胨多聚HIPOLYPEPTON

◆概要

  本品是牛奶酪蛋白经过酶降解后纯化、烘干而成的粉末,易溶于水,不溶于乙醇或yi醚

标准值

总氮

11%以上

氨基酸态氮(Van Slyke定氮法)

5~7%

灼烧残渣

10%以下

干燥失重

6%以下

应用

1) 本产品是收录于日本药典和生物制品标准,是无菌实验培养基的氮源的理想选择。另外可用于卫生检验方法中饮用水和食品卫生检查指标中

      的微生物检测用培养基

2) 因其含有大量色氨酸,用于吲哚生成实验能得到良好的实验结果。

3) 还可用于对酪蛋白酶降解产生蛋白胨来说bi不可少的Dubos &Middlebrook的结核菌培养基,以及其他微生物的大量培养基。

多聚蛋白胨 S

HIPOLYPEPTON S

◆概要


  本产品是脱脂大豆经过酶降解后纯化、烘干而成的植物性蛋白胨粉末,易溶于水,不溶于乙醇
或yi醚

标准值

总氮

7%以上

氨基酸态氮(Van Slyke定氮法)

3~5%

灼烧残渣

23%以下

干燥失重

6%以下

◆应用

1) 补充多聚蛋白胨(适用于日本药典酪蛋白制造的蛋白胨)性能时使用;

2) 广泛应用于微生物的培养,也适用于药用真菌、植物病原真菌、沙门氏菌、奈瑟氏菌、梭状芽孢杆菌等生长困难的细菌培养。

多聚蛋白胨 N

HIPOLYPEPTON N

概要

  本产品是大豆提纯产品经过微生物来源的酶降解后纯化、烘干而成的植物性蛋白胨粉末,其性能与多聚蛋白胨相同。

标准值

总氮

12%以上

氨基酸态氮(Van Slyke定氮法)

5~7%

灼烧残渣

15%以下

干燥失重

6%以下

◆应用

非动物性蛋白胨,用途和多聚蛋白胨相同。

多聚蛋白胨 NS

HIPOLYPEPTON NS

◆概要

  本产品是使用微生物酶降解大豆提纯产品后纯化、烘干而成的植物性蛋白胨粉末。性能和多聚蛋白胨S相同。

◆标准值

总氮

7%以上

氨基酸态氮(Van Slyke定氮法)

3~5%

灼烧残渣

23%以下

干燥失重

9%以下

◆应用

非动物性蛋白胨的用途和多聚蛋白胨S相同。

高酪蛋白酸“DAIGO”

HICASAMONO ACIDS DAIGO

◆概要

  本产品是牛奶酪蛋白的酸降解物。其中,蛋白质几乎均被分解成氨基酸,而且几乎不含蛋白质以外的营养源和生长因子。它可用作细菌生理学、遗传学等基础领域里使用的培养基的纯氮源,或作为定量维生素(特别是B12)培养基里的氮源。还可以像MH琼脂培养基等不适合酶消化蛋白胨使用的培养基作为营养源来使用。

◆标准值

总氮

7%以上

氨基酸态氮(Van Slyke定氮法)

54~83%

灼烧残渣

52%以下

干燥失重

8%以下

氯化物(NaCl)

28~40%

pH值

6~7

产品编号

产品名称

产品规格

Wako 392-02115

多聚蛋白胨 500g

500 g

Wako 398-02117

多聚蛋白胨 20kg

20 kg

Wako 394-02175

多聚蛋白胨 S 500g

500 g

Wako 390-02177

多聚蛋白胨 S 20kg

20 kg

Wako 397-02121

多聚蛋白胨 N 300g

300 g

Wako 395-02127

多聚蛋白胨 N 10kg

10 kg

Wako 393-02101

多聚蛋白胨 NS 300g

300 g

Wako 391-02107

多聚蛋白胨 NS 10kg

10 kg

Wako 393-02145

高酪蛋白酸“DAIGO” 500g

500 g

Wako 399-02147

高酪蛋白酸“DAIGO” 10kg

10 kg

Wako,蛋白胨多聚HIPOLYPEPTON

Wako,蛋白磷酸化研究的预制胶

蛋白磷酸化研究的预制胶SuperSep Phos-tag™,145-08221产品简介:
产品品牌:Wako
产品名称:蛋白磷酸化研究的预制胶SuperSep Phos-tag™
产品货号:192-17401
产品规格:5块
蛋白磷酸化研究的预制胶

蛋白磷酸化研究的预制胶SuperSep Phos-tag™192-17401

蛋白磷酸化研究的预制胶SuperSep Phos-tag™,145-08221产品简介:

产品品牌:Wako

产品名称:蛋白磷酸化研究的预制胶SuperSep Phos-tag™

产品货号:192-17401

产品规格:5块

Wako,蛋白磷酸化研究的预制胶

SuperSep Phos-tag™ 是研究蛋白磷酸化的方法,无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记。

Wako,蛋白磷酸化研究的预制胶

◆SuperSep Phos-tag™

  Phos-tag™ 是一种预制胶,预先加入了 50 μmol/L 的 Phostag™ Acrylamide,打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子,在中心凝胶缓冲液中保存稳定性很好,得到的带条结果也很整齐。

  磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白作为不同条带分离。

  分离后,胶可用于考马斯亮蓝染色,免疫印迹和质谱实验。

◆Phos-tag™ SDS-PAGE 的原理

Wako,蛋白磷酸化研究的预制胶

◆在 HighWire Search 上搜索到的论文数

Wako,蛋白磷酸化研究的预制胶

◆运用

利用 p35 的丙氨酸突变体确定 Cdk5 激活 p35 的磷酸化位点

  p35 常见的磷酸化位点是 Ser8 和 Thr138。但是 Ser8 和 Thr138 位点往往会发生丙氨酸突变,产生3种突变体(Ser8 突变体:S8A,Thr138 突变体:T138A,Ser8 和 Thr138 双突变体:2A)。这3种突变体、野生型 p35、Cdk5 和没有激酶活性的 Cdk5 都来源于 COS-7 细胞。这些细胞裂解液用Phos-tag™ SDS-PAGE 和 Western blotting 进行检测(检测抗体:p35 抗体)。

Wako,蛋白磷酸化研究的预制胶

100 μM Phos-tag ™ 丙烯酰胺, 7.5% 聚丙烯酰胺凝胶

可明确磷酸化位点和条带迁移率的关系!

– 泳道1(条带 L2 和 L4)和泳道5(条带 M1):p35 在 Cdk5 的作用下发生了磷酸化;

– 泳道1(条带 L2 和 L4)和泳道3(条带 L2 和 L4):在无激酶活性 Cdk5 的作用下,大约有一半 p35 蛋白在 Thr138 位点发生磷酸化,同样在 138 位发生突变的 p35 蛋白亦是如此。

– 泳道5 (条带 M1)和泳道6(条带 L3 和 L4):Ser8 和 Thr138 是主要的磷酸化位点;

– 泳道5(条带 M1)、泳道7(条带L1和L2)和泳道8(条带M2):条带 M1 是 Ser8 和T hr138 都发生磷酸化的条带;

条带 M2 是只有 Ser8 磷酸化的条带;条带 L1 和 L2 是只有 Thr138 磷酸化的条带。

※ 条带 L1 和 L3 中的X是不确定哪个位点发生磷酸化的条带;

※ 条带L4是非磷酸化的 p35 。

【参考文献】

▪ Quantitative Measurement of in Vivo Phosphorylation States of Cdk5 Activator p35 by Phos-tag ™ SDS-PAGE. T. Hosokawa, T. Saito, A. Asada, K. Fukunaga, and S. Hisanaga,Mol. Cell. Proteomics, Jun 2010;9: 1133 – 1143.

【结果提供】

理化学研究所 脑科学综合研究中心 回路功能研究核心 记忆功能研究团队 细川智永(Dr. T. Hosokawa)

首都大学东京 理工学研究科 生命科学专业 神经分子功能研究室 久永真市(Dr. S. Hisanaga)

检测含有 Dnmt1 磷酸化激酶的片段

Wako,蛋白磷酸化研究的预制胶

我们可以确定在片段中含有目的激酶!

① 采用亲和色谱法从鼠脑提取液中纯化 GST-Dnmt1(1-290)结合蛋白

② 使用 0.3 M 和 1 M NaCl 的 DNA 纤维素柱洗脱得到目的蛋白

③ GST-Dnmt1(1-290)作为体外激酶实验的反应底物

④ Phos-tag ™ SDS-PAGE 用于Western blotting,确定迁移条带中每个片段的激酶活性

【参考文献】

The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is regulated by phosphorylation with casein kinase 1delta/epsilon. Y. Sugiyama, N. Hatano, N. Sueyoshi, I. Suetake, S. Tajima, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and I. Kameshita, Biochem. J., May 2010; 427(3): 489-97.

【结果提供】

高知大学 综合研究中心 生命、功能物质部门 实验实习机器设施 杉山康宪(Dr. Y. Sugiyama)

香川大学 农学部 应用生物科学科 动物功能生化学研究室 龟下勇(Dr. I. Kameshita)

二维电泳中的应用:分析 hnRNP K 磷酸化异构体

  小鼠巨噬细胞 J774.1 经 LPS 刺激后,裂解细胞,经过免疫沉淀法分离得到 hnRNP K。在二维电泳中,一维是 IPG 胶,二维是 Phos-tag ™ SDS-PAGE,可分离 hnRNP K 的异构体。利用质谱仪,可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。

Wako,蛋白磷酸化研究的预制胶

同一个等电点的位置上,不同位点发生磷酸化都可以被区分开来

(例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7)

【参考文献】

▪ Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics, Nov 2010; 10(21): 3884-95.

【结果提供】

横滨市立大学 生命纳米系统科学研究科 生物体超分子系统科学专业 木村弥生(Dr. Y. Kimura)、平野久(Dr. H. Hirano)

理化学研究所 RCAI 小原收

◆备注

样品制备:

Phos-tag SDS-PAGE 对于蛋白样品中的杂质非常敏感,尤其是螯合剂,钒酸,无机盐,表面活性剂这类物质。

强烈建议在 Phos-tag SDS-PAGE 之前通过 TCA 沉淀或渗析法降低杂质含量。

转膜前处理:

另一个必须的步骤是在转膜前,用 EDTA 去除凝胶中的金属离子(Mn2+ 或者Zn2+);该步骤可提高蛋白的转膜效率。

● 分别准备 10 mmol/L 含 EDTA 和不含 EDTA 两种 1x transfer buffer。

● 将凝胶浸泡在含 10 mmol/L EDTA 的 1x transfer buffer,至少 20 分钟,温和摇晃。更换新缓冲液,重复3次。

● 将凝胶浸泡在不含 10 mmol/L EDTA 的 1x transfer buffer,10 分钟,温和摇晃。

● 转膜操作*。

* 建议用湿法转膜,以提高转膜效率。

Wako,蛋白磷酸化研究的预制胶

◆质量控制

  每一批 SuperSep Phos-tag™,出厂前均根据其产品规格进行测试,以保证可分离磷酸化和非磷酸化蛋白,以及他们的分离成都在正常参数内。

保存温度

2-10℃

◆产品信息

用于 Bio-Rad 伯乐电泳仪

货号

品名

电泳仪

规格

198-17981

SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/L), 7.5%, 17well,

83×100×3.9mm

Mini-PROTEAN®

Tetra Cell

(Bio-Rad Laboratories, Inc.)

5 块

195-17991

SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/L), 12.5%, 17well,

83×100×3.9mm

5 块

用于 Life Technologies 电泳仪

货号

品名

电泳仪

规格

192-18001

SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/L), 7.5%, 17well,

100×100×6.6mm

XCell SureLock®

Mini-Cell

(Life Technologies, Inc.)

5 块

199-18011

SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/L), 12.5%, 17well,

100×100×6.6mm

5 块

用于 Wako EasySeperator 电泳仪

产品编号

产品

凝胶浓度

孔数

包装

192-17401

SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L)
Phos-tag™ 预制胶50 μmol/L

6.0%

13孔

5块

199-17391

6.0%

17孔

5块

195-17371

7.5%

13孔

5块

192-17381

7.5%

17孔

5块

193-16711

10.0%

13孔

5块

190-16721

10.0%

17孔

5块

195-16391

12.5%

13孔

5块

193-16571

12.5%

17孔

5块

193-16691

15.0%

13孔

5块

196-16701

15.0%

17孔

5块

197-16851

17.5%

13孔

5块

194-16861

17.5%

17孔

5块

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Phos-tag 17

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