T7 RNA 聚合酶（高浓度）货号 #M0460T-NEB酶试剂

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T7 RNA 聚合酶（高浓度）收藏

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#M0460T

50,000 units

6,389.00

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无

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浓度

1,000,000 units/ml

特性

使用 T7 噬菌体启动子进行体外转录

该产品为高浓度版本的 T7 RNA 聚合酶（NEB＃M0251）

适用于有经验的体外转录用户

随产品提供 RNA 聚合酶反应缓冲液和氯化镁

概述

T7 RNA 聚合酶（高浓度）的浓度为标准 T7 RNA 聚合酶（NEB＃M0251）的 20 倍，是希望自己建立和优化体外转录反应体系的有经验用户的理想选择。该酶配有 RNA 聚合酶反应缓冲液和氯化镁溶液，可进一步调试不同条件，例如核苷酸浓度。

对于标准 RNA 合成和高产量反应，我们推荐使用 T7 RNA 聚合酶（NEB＃M0251）和 HiScribe™ 试剂盒。HiScribe 试剂盒特别适合在短时间内以最少的优化，合成出高质量、高产量的 RNA。

体外转录除了 T7 RNA 聚合酶外还涉及多种成分，包括核糖核苷酸、无机焦磷酸酶和 RNase 抑制剂，这些均可单独购买。详细信息请参考“相关产品”部分。如需更多转录优化方案，请参阅相关文献。

噬菌体 T7 RNA 聚合酶是一种 DNA 依赖性 RNA 聚合酶，对 T7 噬菌体启动子具有高度特异性。该酶的分子量为 99 kD，它以 T7 启动子后的 DNA 序列为模板催化体外 RNA 合成。使用 T7 RNA 聚合酶合成的 RNA 适用于科研和生物技术的诸多应用。

产品来源

来源于 E.coli 菌株，携带 T7 RNA 聚合酶基因。

随产品提供的试剂

	储运温度(°C)	浓度
RNAPol Reaction Buffer	-20	10 X
MgCl₂ solution		0.2 M

产品类别：miRNA & siRNA 产品、RNA 相关试剂

应用：RNA 分析，体外合成（IVT）

特色应用

mRNA 用于体外翻译和显微注射

放射标记的 RNA 探针

非同位素 RNA 标记

制备 RNA 疫苗

靶基因的向导 RNA

RNA 的结构、加工以及催化作用的研究

基因表达实验中的反义 RNA

RNA 扩增

等温扩增

yDcpS 货号 #M0463S-NEB酶试剂

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yDcpS 收藏

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#M0463S

20 µl (4,000 U)

3,229.00

无

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特性

* mRNA 帽结构去除，可用带标记的 GTP 类似物进行重新加帽

* 初级转录本 5’ 末端的生物素修饰

* Recappable-seq

概述

yDcpS 是脱帽酶，来源于酿酒酵母（S. cerevisiae），可水解 mRNAm7G 帽结构中 gamma 和 beta 位磷酸基团之间的磷酸二酯键，产物为二磷酸化的 5’末端和 m7GMP。yDcpS 可使全长 mRNA 脱帽，留下的 5’二磷酸末端可用牛痘病毒加帽酶重新加帽。

反应条件

1X yDcpS 反应缓冲液，37℃ 温育。

浓度

200,000 units/ml

模板置换反转录酶混合液货号 #M0466L-NEB酶试剂

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产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

模板置换反转录酶混合液收藏

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#M0466L

100 reactions

4,319.00

无

有

无

#M0466S

20 reactions

1,079.00

无

有

无

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概述

模板置换反转录酶和其相应的反应缓冲液能够在反转录反应中有效地实现模板置换。混合液中含有独特的反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂。与竞争对手的反转录酶产品不同，NEB 的产品不需要添加任何添加剂（如 PEG 或甜菜碱）来优化性能，从而简化了反应建立流程。与模板置换寡核苷酸（TSO）搭配使用，合成的 cDNA 3’端可以选择性地加入已知序列。由此获得的 cDNA 可进行 PCR 扩增，也可作为 5’RACE（ cDNA 末端快速扩增）或第二链 cDNA 合成的模板。

特性

 以极低起始量模板（单细胞/细胞核或 2 pg 总 RNA）制备 RNA-seq 文库

 以最低起始量为 10 ng 的总 RNA 进行 5’RACE

 降低 RNA-seq 或 5’RACE 的背景

 该酶混合液包含小鼠 RNase 抑制剂，不需要额外添加

 兼容各种模板置换寡核苷酸（TSOs）、反转录引物和 DNA 聚合酶,用于扩增全长 cDNA

 与其他的 RNA-seq 方法（例如:Smart-Seq）相比，操作更快捷

模板置换反转录酶混合液中的反转录酶（RT）在其到达 RNA 模板的 5’末端后会添加几个非模板源的核苷酸。这几个非模板源的核苷酸可以与已知序列的模板置换寡核苷酸（TSO）退火，促使反转录酶从 RNA 模板上切换到 TSO 上。得到的 cDNA 含有 3’末端添加有已知序列（TSO 的互补序列）。该特征可用于多种下游应用，例如 cDNA 扩增、5’RACE（cDNA 末端快速扩增）和第二链 cDNA 合成。说明书中有优化的实验流程。

图 1：模板置换流程概览

当到达 RNA 模板的 5’端时，反转录酶会在 cDNA 的 3’端添加几个非模板源的核苷酸。这些非模板源的核苷酸可以与包含已知序列的模板置换引物退火,从而促使反转录酶从 RNA 模板上切换到 TSO 上。所得到的 cDNA 在 3′ 端包含一个通用序列（TSO 的互补序列）

图 2：在单细胞 RNA-seq 实验中,模板置换反转录酶混合液相对于 Smart-seq2 方法的优势

gA.模板置换介导的 cDNA 扩增概述。反转录引物含有 5’接头，它与 TSO 一起在 cDNA 的 5’和 3’末端添加接头。之后可用识别接头序列的引物 PCR 扩增全部反转录产物。

B-D.使用 NEB 模板置换反转录酶混合液或 Smart-seq2 方法(Picelli, S. et al.(2014). Nat. Protoc. 9, 171-81)，用 10 μg Universal Human Reference（UHR） RNA （Agilent）与 ERCC RNA Spike-In Mix I（Thermo Fisher Scientific）生成 cDNA 文库。然后使用 NEBNext® Ultra™ II FS DNA 文库制备试剂盒（NEB＃E7805）将每个 cDNA 文库制成 Illumina 文库，并在 Nextseq 500 上使用 2 x 75 个循环测序。将测序采样 2 x 1.2 M 个 reads（除非另有说明），去掉接头 reads，并且使用 Prinseq 过滤。B.显示的是样品总 reads（Total reads）、去掉接头的 reads（Trimmed reads）和通过 Prinseq 过滤的 reads（Filtered reads）。插图列举了每种方法制备的 cDNA 文库的 Agilent Bioanalyzer 2100 结果。虚线框标注了非特异片段。C.使用 Salmon 将过滤的 reads 与 GENCODE 28 和 ERCC 转录物比对。图中的点表示从每个文库检测到的 TPM（每百万转录数）≥1 的转录物的数量作为测序深度。 D.使用 Hisat 2.0.7 将过滤的读数与 hg19 人参考基因组比对，并使用 Picard SAM / BAM RNA Seq Metrics 工具计算 RNA-seq 指标。该图显示了分布于外显子（红色），rRNA（橙色），内含子（绿色），基因间区域（蓝色）的匹配 reads 和不匹配 reads（灰色）的百分比。

图 3：模板置换反转录酶混合液在 5’RACE 的实验中操作简单,性能优异

A.模板置换介导的 5’RACE 概述。在模板置换反转录反应后，用反向基因特异性引物和正向 TSO 特异性引物进行 5’RACE PCR。

B.使用 NEB 模板置换反转录酶混合液 5’RACE 方案（左）或 Clontech SMARTer 5’/3’RACE 试剂盒（右）对多种 RNA 靶标的 5’RACE 产物进行琼脂糖凝胶分析。加入 1 μg 的 Jurkat 总 RNA，10 pg 的 8 kb 合成 RNA 和 10 ng 的 ERCC RNA Mix 1，用于评估作为转录物长度和拷贝数的性能。在 NEB 的反应中，反转录引物为 oligo (dT)40 VN，TSO 为 GCTAATCATTGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACATrGrGrG，TSO 中特异性 PCR 引物用下划线标注。两种方法使用相同的基因特异性 PCR 引物。靶标名称和预期片段长度如图所示。

图 4：模板置换反转录酶混合液在第二链 cDNA 合成中操作简单，且可捕获完整的 5’末端转录产物

A.模板置换介导的第二链 cDNA 合成概述。在反转录反应后，RNA 模板水解，使用 TSO 作为引物延伸合成第二链 cDNA。

B.使用 1 kb 的合成 RNA 作为模板，使用 poly（dT）40 VN 作为第一链 cDNA 合成的反转录引物。使用模板置换介导的方法或 Gubler 在文献中描述的方法—R and Hoffman,BJ.(1983) Gene,25,263-269，对第二链 cDNA 合成进行三个平行实验。所得到的双链 cDNA 产物使用反向引物用 Sanger 法对第二链 cDNA 进行测序。结果显示模板含有转录起始位点（TSS），并标注出了匹配序列。添加到 cDNA 末端的 TSO 序列用灰色标注。未通过 Gubler 和 Hoffman 方法检测到的序列用蓝色标注。不可信读序区用黄色标注。

随产品提供的试剂

	储存温度(℃)	浓度
模板置换反转录缓冲液	-20	4 X

产品类别：

cDNA合成和反转录产品

PCR，qPCR 和扩增技术产品

应用

cDNA 合成

RNA 分析

储存温度

-20°C

耐热 RNase H 货号 #M0523S-NEB酶试剂

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耐热 RNase H 收藏

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#M0523S

250 units

1,719.00

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特性

耐热 RNase H 货号 #M0523S

概述

耐热 RNaseH 特异性识别并切割 RNA-DNA 杂交体中 RNA 序列的磷酸二酯键，同时保持DNA 序列完整。这种热稳定的核酸酶具有与大肠杆菌 RNaseH 相同的酶学性质，但在更高的温度下具有活性。

反应条件：1X RNase H 反应缓冲液，50℃ 温育。

单位定义：1 单位指 50 μl 反应体系中，50℃ 条件下，20 分钟从 40 pmol荧光标记的 25 bp RNA-DNA 杂交链中水解得到 1 nmol 核糖核苷酸所需的酶量。单位活性检测条件请联系我们。www.neb-china.com 或www.neb.com 。

浓度：5,000 units/ml

Sce 假尿嘧啶合成酶 I 货号 #M0526S-NEB酶试剂

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Sce 假尿嘧啶合成酶 I 收藏

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#M0526S

5,000 pmol

919.00

无

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特性

Sce PUS1 用于在体外将单链 RNA 中尿嘧啶转化为假尿嘧啶

Sce PUS1 是一款独立的酶，不需要 RNA 向导或辅助因子即可修饰 RNA

使用 Sce PUS1 对特定序列进行假尿苷修饰可以替代通过 RNA 聚合酶随机掺入修饰核苷酸的方法

产品说明

该酶是创新酶（Enzyme for Innovation, EFI）。创新酶工程由 NEB 发起，旨在为科研界提供独一无二的酶，从而为新的创新应用的发现创造条件。这些酶均具有独特的功能和特性。

Sce 假尿嘧啶合成酶 I（Sce PUS1）可将单链 RNA 中尿嘧啶转化为假尿嘧啶，对单链 RNA 中尿嘧啶的转化率高于双链 RNA。最佳底物为≥15 nt无特殊结构的 RNA。

Sce 假尿嘧啶合成酶 I 货号 #M0526S

E. coli RNA 聚合酶，核心酶货号 #M0550S-NEB酶试剂

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E. coli RNA 聚合酶，核心酶收藏

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#M0550S

100 units

2,129.00

无

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特性

 E. coli 启动子启动的 RNA 合成

 转录起始研究

 PURExpress 体外转录

概述

E. coli RNA 聚合酶，核心酶由 5 种亚基组成，分别为 α、α、β´ 、β、和 ω。此酶无 σ 因子，因此不会对细菌和噬菌体 DNA 启动子特异性启动转录。本酶保留了从非特异性启动序列转录 RNA 的功能。添加 σ 因子后，本酶可从特定细菌和噬菌体的特异启动子启动合成 RNA。核心酶分子量约 400 kDa。

E. coli RNA 聚合酶，全酶由核心酶和 σ 因子 70 组成，能从 σ 因子 70 特定的细菌和噬菌体启动子处起始合成RNA。

来源

大肠杆菌 RNA 聚合酶，核心酶是由大肠杆菌 BL21 分离而得。σ 因子 70 是由携带 σ 因子 70 克隆基因的大肠杆菌纯化而来。

反应条件

40 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM KCl，10 mM MgCl₂，0.01% Triton-X-100，1 mM DTT，每种 rNTP 各 0.5 mM 和 DNA 模板。37℃ 温育。

质保声明

无 DNA 内、外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位是指在 37℃ 条件下，10 分钟内可将 1 nmol NTP 掺入 RNA 所需的酶量，单位活性检测条件请联系我们。 www.neb-china.com 或 www.neb.com 。

浓度

1,000 units/ml。

DNase I-XT（耐盐）货号 #M0570L-NEB酶试剂

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DNase I-XT（耐盐）收藏

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#M0570L

5,000 units

3,589.00

无

#M0570S

1,000 units

1,059.00

无

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产品特性

DNase I-XT（耐盐）货号 #M0570L

·耐盐型 DNA 特异性核酸内切酶

·用于降解双链和单链 DNA

·产生具有 5′-磷酸和 3′-羟基末端的短链寡核苷酸

·不含 RNase

DNase I-XT（耐盐）特别适用于：

·降解体外转录反应中的 DNA 模板

·去除 RNA 样品中残留的基因组 DNA

产品描述

DNase I-XT（耐盐）是基于 DNase I 改造的耐盐型 DNA 核酸内切酶，可非特异切割 DNA，产生具有 5′-磷酸和 3′-羟基末端的二核苷酸、三核苷酸和寡核苷酸产物 (1,2)。DNase I-XT（耐盐）作用于单/双链 DNA、染色体，以及 RNA:DNA 杂交链上的 DNA。当盐浓度>50 mM 时，不耐盐型 DNase I（无 RNase）（NEB #M0303）的活性会受到抑制，但 DNase I-XT（耐盐）（NEB #M0570）在 50-100 mM 盐浓度范围活性最佳，盐浓度达到 200 mM 时，可维持 65% 活性，300 mM 时，仍有~40% 活性。

图 1：DNase I-XT（耐盐）在盐浓度> 100 mM，能高效降解 DNA

在等摩尔的 DNase I (NEB #M0303) 和 DNase I-XT（耐盐）(NEB #M0570) DNase 活性比较中，DNase I-XT（耐盐）展示出更高的耐盐特性。检测方法为：在 1X DNase I 反应缓冲液中，消化标记有荧光和淬灭基团的发夹 dsDNA 底物（35 nt），荧光强度反映出不同盐浓度条件下的酶活（如图所示）。结果显示：DNase I 活性随着盐浓度的增加而下降，而耐盐的 DNase I-XT 在高达 300 mM 盐浓度中仍保持活性。

图 2：DNase I-XT（耐盐）能够更完全的去除 IVT 反应和 RNA 中的 DNA

20 μl 体外转录产物用以下三种方法检测去除残留 DNA 的效果：1) 无 DNase I；2) 2 U TURBO^® DNase 或 3) 2 U DNase I-XT（耐盐），37°C 条件下孵育 15 分钟。分别使用 Monarch RNA 纯化试剂盒（500 µg）（NEB #T2050）纯化，以无核酸酶水（50 µl）洗脱。使用 Luna 通用探针法 qPCR 预混液（NEB #M3004）通过 qPCR 检测 DNA 残留水平。将每个样品的平均 Cq 值与标准曲线（灰色）进行比较，以评估可 PCR-扩增 DNA 的百分比。TURBO DNase 和 DNase I-XT（耐盐）的使用都不需要对 IVT 反应产物进行稀释，但是，DNase I-XT（耐盐）对 IVT 反应中的 DNA 模板去除更彻底，难以通过 qPCR 检测到。

图 3：DNase I-XT（耐盐）有效去除 RNA 粗提产物中的残留 DNA

DNase I-XT（耐盐）货号 #M0570L

RNA 粗提样本用以下四种方法检测去除残留 DNA 的效果：1) 无 DNase I；2) 在 DNase I-XT 反应缓冲液中加入 DNase I-XT（耐盐）(2 U, NEB #M0570)；3) 在 DNase I 反应缓冲液中加入 DNase I (2 U, NEB #M0303)；4) 在 TURBO DNase 反应缓冲液中加入 TURBO DNase (2 U, ThermoFisher) ，37°C 条件下孵育 15 分钟。使用 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒 (NEB #E3005) 和人类或小鼠 Actin 外显子引物，通过（+/- RT）qPCR 检测对残留的基因组 DNA (gDNA) 进行定量。以 qPCR（无反转录，仅扩增DNA）与 RT-qPCR（有反转录，同时扩增 DNA 和 RNA）平均 Cq 值的差值评估 DNase 去除 DNA 的效果。结果显示：对于 RNA 粗提产物中的残留 gDNA，DNase I-XT（耐盐）比 TURBO DNase 去除效果更彻底。

NudC 焦磷酸酶货号 #M0607S-NEB酶试剂

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NudC 焦磷酸酶收藏

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#M0607S

250 pmol

889.00

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特性

·对含 ADP 的、非经典启动核苷酸，如 NAD⁺ 和 NADH 进行脱帽，生成可连接的 5′ 末端为单磷酸的基团

·水解 NADH 生成 AMP 和还原型烟酰胺单磷酸核苷（NMNH）；水解 NAD⁺产生 AMP和烟酰胺单磷酸核苷（NMN⁺）

·水解二磷酸二核苷酸和含有 ADP 基团的代谢辅助因子，如 AppA、FAD、辅酶 A 等

·当 NAD⁺ 是 RNA 的 5’ 启动核苷酸时，可用于 NAD⁺ 脱帽或去除 NAD

·适用于基于连接方法的研究，如 5’ RACE 和 RNA 测序，以检测和鉴定含有非经典启动核苷酸的RNA

该酶是一种创新酶（EFI，Enzyme for Innovation）。EFI 是由 NEB 发起的一个项目，旨在为科学界提供独特的酶，以期发现新应用。这类酶既有趣又特别。

概述

NudC 是 NUDIX 焦磷酸酶家族中的一员，可高效水解带 NAD⁺ 帽和 NADH 帽的 RNA，生成连接可用的带 5′ 单磷酸末端的 RNA（NAD⁺ 脱帽或去除 NAD）^（1）。研究表明：nudC 基因的缺失增加了大肠杆菌中 NAD⁺ 帽化 RNA 的比例^（2）。

该酶还能以不同的效率水解含 ADP 基团的小分子，如 NADH、NAD⁺、AppA、ADP-核糖、ADP-葡萄糖和代谢辅助因子，如 FAD、辅酶 A 和乙酰辅酶 A^{（3 和未发表结果）}。由于其对各种二核苷酸和代谢辅因子的活性，该酶有望通过对帽的焦磷酸化水解作用和核苷酸产物的分析，来识别带有非经典帽结构的 RNA，或使用基于 5′ 连接的方法（如 RNA 测序或 5′ RACE^（4））来识别带有 5′ 单磷酸末端的 RNA。

随酶提供的试剂

NEBuffer™ 3.1

100 mM DTT

浓度

10 µM

单位定义

在 1X NEBuffer 3.1 和 5 mM DTT 的反应条件中，加入 1 µM NudC，37℃ 温育 30 分钟，能将 200 µM 或更多 NAD⁺ 水解成 NMN⁺ 和 AMP。

反应条件

1X NEBuffer™ 3.1，补加 5 mM DTT，37℃ 温育。

热失活

65℃ 加热 10 分钟。

储存温度

-20℃

质保声明

NudC 焦磷酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。

参考文献

1. Frick D.N. and Bessman M.J. (1995). J. Biol. Chem. 270, 1529-1534.

2. Cahová, H. et al. (2015). Nature. 519, 374-377.

3. Höfer K. et al. (2016). Nat Chem Biol. 12, 730-734.

4. Vvedenskaya I.O., et al (2018). Mol Cell. 70, 553-564.e9.

Taq PCR 试剂盒货号 #E5000S-NEB酶试剂

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 常规 PCR

Taq PCR 试剂盒收藏

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#E5000S

200 次反应

1,249.00

无

有

无

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Taq DNA 聚合酶信息

Taq PCR 试剂盒货号 #E5000S

概述

Taq DNA 聚合酶是一种耐热聚合酶，具有 5´ →3´ 聚合酶活性和 5´ 结构特异性核酸内切酶活性。该酶是 PCR 中应用最广泛的酶。为了便于各种 PCR 反应，Taq DNA 聚合酶配套有不同的反应缓冲液。标准 Taq缓冲液专门针对已有的 PCR 平台所设计，它是 DHPLC 和高通量实验的理想选择。NEB 设计的 ThermoPol 缓冲液能够提高反应产量，即使是在苛刻的条件下也表现不凡。更为方便的是，Taq DNA 聚合酶还有试剂盒以及预混液两种剂型可供选择。此外还提供了 Quick-Load Taq 2X 预混液剂型，可用于直接凝胶上样。

Taq 热启动 DNA 聚合酶

超高的性价比、有吸引力的商业条款，NEB 的热启动 Taq 是分子诊断和其它应用的理想选择。与化学修饰或基于抗体结合的热启动聚合酶不同，NEB 的热启动 Taq 利用一种基于核酸适配体（aptamer）技术。这种独特的核酸适配体通过非共价键作用与聚合酶结合，从而抑制聚合酶在非许可温度下的聚合反应。这种新方法不需要激活步骤，减少样品降解的可能性、缩短整个反应时间。

其它剂型

为了加样方便，Taq 与 Taq 热启动 DNA 聚合酶均有预混液剂型可供选择。Taq 2X 预混液还有 Quick-Load 的形式，可用于直接凝胶上样。Taq PCR 试剂盒包含 Taq DNA 聚合酶、dNTP 混合液、缓冲液、MgCl₂和紫色 Quick-Load 2-Log DNA Ladder。

多重 PCR 5X 预混液配方经过专门优化可以提高多重 PCR 反应的表现。

浓度

5,000 units/ml。

Taq 缓冲液选择表

Taq PCR 试剂盒货号 #E5000S

mRNA 脱帽酶货号 #M0608S-NEB酶试剂

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mRNA 脱帽酶收藏

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#M0608S

2,000 U

1,179.00

无

有

无

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特性

mRNA 脱帽酶可使带有 m⁷G 帽结构的 mRNA 脱帽，产生 5’单磷酸末端。

·有效替代烟草酸焦磷酸酶（TAP）

·去除 Cap 0 和 Cap 1 的效率相同

·适用于 5’RLM-RACE 和 RNA-seq

·1 µl 的酶可在 15 min 内将 20 µg 的 mRNA（1.7 kb）完成脱帽

产品信息

mRNA 脱帽酶可以将 mRNA 5’末端的 7-甲基鸟苷帽（m⁷G）结构去除，产生 5’单磷酸末端并释放 m⁷GDP。mRNA 脱帽酶能够使各种长度的 mRNA 脱帽，对 Cap 0 和 Cap 1 的去除效率相同。mRNA 脱帽酶也可将 5’三磷酸末端转化为 5’单磷酸，但转化效率相对较低。5’单磷酸化的 RNA 可用于多种下游应用，包括 5’RNA 连接酶介导的 RACE、RNA-seq 和 5’→3’核酸外切酶消化。

mRNA 脱帽酶（MDE）和烟草酸焦磷酸酶（TAP）脱帽活性的比较

mRNA 脱帽酶货号 #M0608S

（图 A）用 mRNA 脱帽酶（MDE）或其它品牌的烟草酸焦磷酸酶（TAP）对 500 nM 的 5’加帽 RNA（25 nt）溶液进行脱帽反应。每种酶使用各自适合的反应缓冲液，且反应体积相同。其它品牌的 TAP 浓度未知，经比较显示 0.3 nM 的 MDE 与 1 µl 的 TAP 活性相当。脱帽反应后的反应产物使用毛细管电泳分析。需要注意的是，在阴性对照中，所用的合成底物中都存在 10％的三磷酸 RNA。（图 B）测试了在其它条件不变的情况下，引入不同长度、不同种类末端的 RNA，是否会影响 MDE 的活性，在反应中添加 500 ng Jurkat 细胞总 RNA。结果显示：MDE 的脱帽活性不受影响，而 TAP 活性则显着降低，这说明 MDE 的脱帽能力在该测试条件下更稳定。

随酶提供的试剂

	储存温度 (°C)	浓度
mRNA Decapping Enzyme Reaction Buffer

储存温度

-20°C

牛痘病毒加帽系统货号 #M2080S-NEB酶试剂

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牛痘病毒加帽系统收藏

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规格

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#M2080S

400 units

1,539.00

有

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特性

 体内或体外翻译前 mRNA 的加帽

 标记 mRNA 5´ 末端

概述

牛痘病毒加帽体系利用牛痘病毒加帽酶及其它组份，将 7-甲基鸟苷帽结构（Cap 0）加到 RNA 的 5´ 末端。在真核生物中，该类末端帽结构影响到 mRNA 的稳定、转运和翻译。使用酶促反应为 RNA 加帽是一种简单有效的方法，对用于体外转录、转染和显微注射的 RNA，能改善其稳定性和翻译能力。另外，反应中所用到的标记 GTP 还能提供一种便捷的标记方法，将 5´ 末端带有三磷酸的任何 RNA 进行标记。

牛痘病毒加帽酶由两个亚基（D1 和 D12）组成，具有三种酶活性（D1 亚基具有 RNA 三磷酸酶和鸟苷转移酶活性；D12 亚基具有鸟嘌呤甲基转移酶活性），所有这些活性都是添加一个完整的 Cap 0 结构，即 m⁷Gppp (5´ ) N 所必需的。加帽反应不仅高效而且方向正确，不像共转录会添加上一些帽类似物。

来源

携带牛痘病毒（WR）加帽酶基因的 E. coli 菌株。

反应条件

1X 加帽反应缓冲液

[50 mM Tris-HCl（pH 8.0 @ 25℃），5 mM KCl，1 mM DTT，1 mM MgCl₂]，37℃ 温育。

提供的试剂

牛痘病毒加帽酶

加帽缓冲液（10X）

GTP 溶液（10 mM）
SAM 溶液（32 mM）

质保声明

无单链或双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指 37℃ 条件下，1 小时内将 10 pmol (α^-32P) GTP 掺入到一条 80 个核苷酸的转录产物上所需要的酶量。

浓度

10,000 units/ml。

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。

NEBuffer 2.1（10X）货号 #B7202S-NEB酶试剂

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NEBuffer 2.1（10X）收藏

货号

规格

价格(元)

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苏州库存

#B7202S

5.0 ml

339.00

无

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停产通知

该产品于 2021 年 12 月 15 日停产，替代产品为 NEBuffer^™ r2.1（NEB #B6002）

概述

为确保内切酶发挥 100% 的酶切活性，NEB公司随酶免费提供 10X 反应缓冲液（NEBuffer）。绝大多数内切酶配有四种标准反应缓冲液中的一种，但有些内切酶配有特殊的反应缓冲液。四种标准反应缓冲液具有不同颜色标记，以便实验者使用方便。

贮存条件

-20℃。

Faustovirus 病毒加帽酶（FCE）货号 #M2081L-NEB酶试剂

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Faustovirus 病毒加帽酶（FCE）收藏

货号

规格

价格(元)

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成都库存

苏州库存

#M2081L

2500 units

4,219.00

无

#M2081S

500 units

1,059.00

无

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产品特性

·Faustovirus 病毒加帽酶（FCE）用于在 RNA 5′末端的三磷酸和二磷酸位置加 m7G-帽（Cap-0）

·有效提高加帽效率，适用于困难加帽底物

·使用更少的酶即可高效加帽

·反应温度范围更宽，更灵活

·平移替代牛痘加帽系统（VCE），几乎无需优化

·Faustovirus 病毒加帽酶（FCE）与mRNA帽结构 2′-O-甲基转移酶协同作用，可一步加帽至 Cap-1 结构

·FCE 无专利费

产品描述

Faustovirus 病毒加帽酶（FCE）在转录产物 5′末端的三磷酸和二磷酸位置催化加入 N⁷–甲基鸟苷帽（m7G），产生带有 Cap-0 帽的 RNA。FCE 是一种单亚基酶，具有给 RNA 加 Cap-0 帽所需的三种酶活：三磷酸酶，鸟嘌呤转移酶，（鸟嘌呤-N7）–甲基转移酶。真核生物 mRNA 成熟的关键步骤是：添加 Cap-0 帽结构、第一个核苷酸 2′-O-甲基化（Cap-1）和多聚腺苷化加尾（poly（A））。Cap-0 结构还增加了 RNA 的稳定性，避免三磷酸化的 RNA 激活天然免疫反应。

FCE 从低温至 55℃ 高温范围内，均能够维持加帽活性。一般情况下，1 µl FCE（25 units）可以在 37°C 条件 1 小时内完成＞100 µg RNA 的加帽。本产品提供加帽所需的 GTP 和 S-腺苷甲硫氨酸（SAM）。

来源：由大肠杆菌（E. coli）质粒表达 Faustovirus 病毒加帽酶（FCE）编码序列，C-端带有 His-tag。

图 1：FCE 提高加帽效率，优化操作流程

Faustovirus 病毒加帽酶（FCE）货号 #M2081L

A. 分别使用 FCE 和牛痘病毒加帽系统（VCE）在 37℃ 条件下加帽。以含有不同 5´-UTR 序列（如图所示）的 FLuc 转录本（1.77 kb）作为加帽底物（200 μg，相当于约 350 pmol，浓度为 7 μM），分别使用 FCE（25 units 相当于 1 pmol，在 50 μl 体系中浓度为 20 nM）或 VCE（25 units 相当于 1 pmol，在 50 μl 体系中浓度为 20 nM）37℃ 孵育 1 小时。需要注意的是，上述条件低于我们推荐的酶用量，用以展示 FCE 比 VCE 的加帽效率更高，以及在流程优化上的优势。

B. 使用 FCE 分别在 37℃ 和 42℃ 条件下进行 mRNA 加帽。以含有不同 5´-UTR 序列（如图所示）的 FLuc 转录本（1.77 kb）作为加帽底物（200 μg，相当于约 350 pmol，浓度为 7 μM），使用 FCE（25 units 相当于 1 pmol，浓度为 20 nM）37℃ 孵育 1 小时。需要注意的是，上述条件低于我们推荐的酶用量，用以展示 FCE 在流程优化上的优势。加帽反应体系为 50 μl，含有 0.1 mM SAM、0.5 mM GTP、以及用于 FCE 反应的 1X FCE 加帽缓冲液或用于 VCE 反应的 1X 加帽缓冲液。反应结束后，进行靶向 RNase H 切割，并使用 LC-MS 检测 mRNA 加帽效率。

图 2：FCE 的 RNA 加帽反应适用于更宽泛的温度范围

分别使用 FCE 和 VCE 在 15℃-60℃ 条件下进行 RNA 加帽。20 μl 加帽反应体系中含有：2.5 μM RNA 底物（5´-三磷酸 20mer 3´-FAM）、8 nM 加帽酶、0.1 mM SAM 和 0.5 mM GTP。FCE 加帽反应在 1X FCE 加帽缓冲液中进行，VCE 加帽反应在 1X 加帽缓冲液中进行。所有反应在指定的反应温度下孵育 30 分钟。通过毛细管电泳检测反应产物。

图 3：FCE 可对各种 RNA 进行高效 5’加帽（50 units至少加帽 100 ug RNA）

上图展示了 FCE 对多种 mRNA 的加帽效果。以含有不同 5´-UTR 序列（如图所示）的 FLuc 转录本（共 1.77 kb）作为加帽底物（200 μg，相当于约 350 pmol，浓度为 3.5 uM），在含有 1X FCE 缓冲液的 100 μl 反应体系中加入 2 μl 的 FCE（50 units 相当于 2 pmol，浓度为 20 nM），37℃ 条件下孵育 1 小时。反应结束后，进行靶向 RNase H 切割，并使用 LC-MS 检测 mRNA 加帽效率。

NEBuffer 3.1（10X）货号 #B7203S-NEB酶试剂

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货号

规格

价格(元)

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苏州库存

#B7203S

5.0 ml

339.00

无

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停产通知

该产品于 2021 年 12 月 15 日停产，替代产品为 NEBuffer^™r3.1（NEB #B6003）

概述

贮存条件

-20℃。

NEBuffer 成分

NEBuffer 1.1（黄）：

10 mM Bis Tris Propane-HCl, 10 mM MgCl2, 100 μg/ml

BSA（pH 7.0 @ 25℃）。

NEBuffer 2.1（蓝）：

50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 100 μg/ml

BSA（pH 7.9 @ 25℃）。

NEBuffer 3.1（红）：

100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 100 μg/ml

BSA（pH 7.9 @ 25℃）。

CutSmart 缓冲液（绿）：

50 mM KAc, 20 mM Tris-Ac, 10 mM Mg(Ac)2, 100 μg/ml

BSA（pH 7.9 @ 25℃）。

NEBuffer EcoRI：

50 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 0.025% Trition® X-100 (pH 7.5 @ 25℃)。

注意：使用前，反应缓冲液（NEBuffer）应彻底融化并混匀。

Taq 2X 预混液货号 #M0270L-NEB酶试剂

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 常规 PCR

Taq 2X 预混液收藏

货号

规格

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#M0270L

500 次反应 (50 μl 反应体系)

1,499.00

有

无

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Taq DNA 聚合酶信息

Taq 2X 预混液货号 #M0270L

概述

Taq 热启动 DNA 聚合酶

其它剂型

多重 PCR 5X 预混液配方经过专门优化可以提高多重 PCR 反应的表现。

浓度

5,000 units/ml。

Taq 缓冲液选择表

Taq 2X 预混液货号 #M0270L

无机焦磷酸酶（Yeast）货号 #M2403L-NEB酶试剂

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产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

无机焦磷酸酶（Yeast）收藏

货号

规格

价格(元)

北京库存

上海库存

广州库存

成都库存

苏州库存

#M2403L

50 units

3,149.00

有

无

有

无

有

#M2403S

10 units

779.00

有

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特性

 反转录反应中提高 RNA 产量
 增强 DNA 复制能力

概述

无机焦磷酸酶（PPase）催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐。
P₂0₇^–4 + H₂0 → 2HP0₄^–2

来源

无机焦磷酸酶（E. coli）纯化自携带 E. coli 无机焦磷酸酶基因的重组 E. coli 菌株。

无机焦磷酸酶（酵母）纯化自重组 E. coli 菌株，携带有从酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）克隆的 ppa 基因和蟾分枝杆菌（Mycobacterium xenopi）GyrA 内含肽的融合基因。由 Biohelix 公司（现在是Quidel 公司的全资子公司）研发，由 New England Biolabs 生产。

质保声明

无机焦磷酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请联系我们。

单位定义

1 单位指标准反应条件下每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐所需的酶量。单位活性检测条件请联系我们。

浓度

100 units/ml。

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。

CutSmart 缓冲液（10X）货号 #B7204S-NEB酶试剂

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货号

规格

价格(元)

北京库存

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#B7204S

5.0 ml

339.00

无

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停产通知

该产品于 2021 年 12 月 15 日停产，替代产品为 rCutSmart^™ 缓冲液（NEB #B6004）

概述

贮存条件

-20℃。

NEBuffer 成分

NEBuffer 1.1（黄）：

10 mM Bis Tris Propane-HCl, 10 mM MgCl2, 100 μg/ml

BSA（pH 7.0 @ 25℃）。

NEBuffer 2.1（蓝）：

50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 100 μg/ml

BSA（pH 7.9 @ 25℃）。

NEBuffer 3.1（红）：

100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 100 μg/ml

BSA（pH 7.9 @ 25℃）。

CutSmart 缓冲液（绿）：

50 mM KAc, 20 mM Tris-Ac, 10 mM Mg(Ac)2, 100 μg/ml

BSA（pH 7.9 @ 25℃）。

NEBuffer EcoRI：

50 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 0.025% Trition® X-100 (pH 7.5 @ 25℃)。

注意：使用前，反应缓冲液（NEBuffer）应彻底融化并混匀。

ssRNA Ladder 货号 #N0362S-NEB酶试剂

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产品资料 – RNA 试剂 – RNA Marker 和 Ladder

ssRNA Ladder 收藏

货号

规格

价格(元)

北京库存

上海库存

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#N0362S

25 gel lanes

779.00

无

有

无

有

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概述

NEB 提供 17-9,000 个碱基的一系列 RNA Marker 和Ladder。ssRNA Ladder 作为 RNA 分子量标准适用于变性或非变性胶，两种 ssRNA Ladder 均随产品附带 2X 上样缓冲液，并提供双倍浓度的片段作为参考条带。microRNA Marker 为即用型，溶于变性缓冲液中，是聚丙烯酰胺凝胶或 Northern blot 中分子量 marker 的最佳选择，用 SYBR-Gold（Molecular Probes 公司）染色可获得最佳效果，同时附带的还有 3´ 生物素标记的 21-mer 寡核苷酸探针，它同样可被 [γ-32P] ATP 和 T4 PNK 标记（NEB #M0201）。dsRNA Ladder 在非变性聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶电泳中均适合作为 dsRNA 和 RNAi 分析的分子量标准。

ssRNA Ladder 货号 #N0362S

浓度

低分子量 ssRNA Ladder 和 dsRNA Ladder 的浓度均为 500 μg/ml；ssRNA Ladder 的浓度为 2,000 μg/ml；MicroRNA Marker 浓度为 12 ng/μl。

NEBuffer EcoRI 货号 #B0101S-NEB酶试剂

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规格

价格(元)

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#B0101S

6.0 ml

249.00

无

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概述

贮存条件

BSA [20 mM Tris-HCl, 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 50% 甘油（pH 8.0 @ 25℃）]。

NEBuffer、BSA 和 SAM 均贮存于 -20℃。

NEBuffer 成分

NEBuffer 1.1（黄）：

10 mM Bis Tris Propane-HCl, 10 mM MgCl2, 100 μg/ml

BSA（pH 7.0 @ 25℃）。

NEBuffer 2.1（蓝）：

50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 100 μg/ml

BSA（pH 7.9 @ 25℃）。

NEBuffer 3.1（红）：

100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 100 μg/ml

BSA（pH 7.9 @ 25℃）。

CutSmart 缓冲液（绿）：

50 mM KAc, 20 mM Tris-Ac, 10 mM Mg(Ac)2, 100 μg/ml

BSA（pH 7.9 @ 25℃）。

NEBuffer EcoRI：

50 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 0.025% Trition

® X-100 (pH 7.5 @ 25℃)。

NEBuffer EcoRI：

50 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 0.025% Trition® X-100 (pH 7.5 @ 25℃)。

注意：使用前，反应缓冲液（NEBuffer）应彻底融化并混匀。

dsRNA Ladder 货号 #N0363S-NEB酶试剂

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产品资料 – RNA 试剂 – RNA Marker 和 Ladder

dsRNA Ladder 收藏

货号

规格

价格(元)

北京库存

上海库存

广州库存

成都库存

苏州库存

#N0363S

25 gel lanes

1,089.00

无

有

无

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概述

NEB 提供分子量大小从 17-9,000 个碱基的一系列 RNA Ladders 和 Markers。低分子量 ssRNA Ladder 适用于变性和非变性凝胶电泳中 RNA 分子量标准。两种 ssRNA Ladder 均提供 2X 上样缓冲液，亮度加倍的条带可作为参照带。microRNA Marker 已溶于即用型变性上样液中，可用作变性聚丙烯酰胺凝胶和 Northern 杂交中分子量标准，使用 SYBR-Gold 染料染色效果最佳。随 Marker 提供 3´ – 生物素标记的 21-mer 寡核苷酸探针，可以用 γ-32P- ATP 和 T4 PNK 标记（NEB #M0201）进行标记。dsRNA Ladder 适用于变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳，作为 dsRNA 和 RNAi 分析的分子量标准。

dsRNA Ladder 货号 #N0363S

浓度

低分子量 ssRNA Ladder 和 dsRNA Ladder 的浓度均为 500 μg/ml；ssRNA Ladder 的浓度为 2,000 μg/ml；MicroRNA Marker 浓度为 12 ng/μl。

2024年 5月
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T7 RNA 聚合酶（高浓度） 收藏

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浓度

特性

概述

特色应用

yDcpS 收藏

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特性

概述

反应条件

浓度

模板置换反转录酶混合液 收藏

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概述

特性

耐热 RNase H 收藏

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特性

概述

Sce 假尿嘧啶合成酶 I 收藏

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特性

产品说明

E. coli RNA 聚合酶，核心酶 收藏

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特性

概述

来源

反应条件

质保声明

单位定义

浓度

DNase I-XT（耐盐） 收藏

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产品特性

产品描述

NudC 焦磷酸酶 收藏

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特性

概述

Taq PCR 试剂盒 收藏

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Taq 热启动 DNA 聚合酶

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产品信息

牛痘病毒加帽系统 收藏

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概述

来源

反应条件

提供的试剂

质保声明

单位定义

浓度

参考文献

NEBuffer 2.1（10X） 收藏

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概述

贮存条件

Faustovirus 病毒加帽酶（FCE） 收藏

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产品特性

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概述

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模板置换反转录酶混合液收藏

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DNase I-XT（耐盐）收藏

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