植物透明化试剂ClearSee™产品简介：产品品牌：Wako产品名称：植物透明化试剂ClearSee产品货号：031-25151产品规格：50 ml植物科学新技术 植物透明化试剂
024-18751，植物科学新技术 植物透明化试剂ClearSee™
植物透明化试剂ClearSee™产品简介：
产品品牌：Wako
产品名称：植物透明化试剂ClearSee
产品货号：031-25151
产品规格：50 ml
植物科学新技术 植物透明化试剂
ClearSee™ 是一种仅需固定、洗净、透明化三步简单操作即可实现植物组织透明化的试剂。作为植物科学的研究工具，期待可以阐明细胞水平的现象和整个个体之间的系统联系。
HP数据：由名古屋大学大学院理学研究科 栗原大辅特任助教、水多阳子研究员提供
◆操作步骤
使用 ClearSee™ 的透明化方法，只需1）固定、2）洗净、3）透明化三个步骤。详细方法可参考随产品附赠的使用说明书。
以下，是拟南芥叶和幼株的使用案例。
1. 固定
① 使用4%甲醛溶液固定样本*1。
② 将样本放入干燥机中，用真空泵减压，在室温下静置30分钟，并固定。
② 以上操作重复两次。
② 为了防止植物样品在减压过程中飞出，建议打开管盖，用封口膜密封，并用针在上面扎孔*2,3。
2. 洗净
去除固定液，加入1 mL的1×PBS缓冲液，静置1分钟。然后去除1×PBS缓冲液，重新加入1 mL的1×PBS缓冲液，静置1分钟。
以上操作重复两次。
3. 透明化处理
去除1×PBS缓冲液，添加1.3 mL的ClearSee™。
打开管盖后用封口膜密封，并用针在上面扎孔。放入干燥机中，用真空泵减压，并在室温下静置1小时。
取下封口膜，盖好管盖。避光，室温静置，透明化*4。
如有需要可更换新的ClearSee™。
4. 透明化过程
图4. ClearSee™中的拟南芥叶和幼株
图5. 可以观察到样本周围叶绿素（1-2天后）
图6. 更换新的 ClearSee™ 后的样本
图7. 透明化的拟南芥叶和动株（3-5天后）
使用ClearSee™ 进行透明化需要的物品
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1. 高压灭菌锅
2. 局部排气系统（通风室等）
3. 真空泵
4. 干燥机
5. 60°C 恒温器
6. 荧光显微镜
7. 锥形管
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8. 微量离心管
9. 封口膜
10. 针
11. 镊子
12. 盖玻片
13. 载玻片
14. 凡士林油
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注意
※ 由于植物活体样本含有空气，添加溶液时植物就会漂浮起来。请尽可能地将植物样本浸入固定液中。
※ 请将干燥机设定在-90 kPa左右。根据植物样本的不同，有时减压会过强。减压过强的话，会破坏植物组织和细胞。开始减压后，由于会抽出植
※ 物样本中的空气，会产生气泡。为了让气泡消失，请缓慢调整减压的压强。
※ 从减压状态恢复至大气压强时，请缓慢进行。如果急速恢复至大气压强的话，会破坏植物组织和细胞。
※ 透明化的时间根据植物种类和组织而异，请参照以下的时间。
※ 根：1~2天、叶和幼株：4~7天、雌蕊：2周、成熟组织：4周。
◆观察案例
5. 观察
在载玻片上用凡士林或油脂制作一个围栏，放入适量 ClearSee™，用镊子将样本移入，盖好盖玻片，并用荧光显微镜观察。由于 ClearSee™干燥后会产生沉淀，所以用凡士林或油脂来防止其干燥。观察结束后，可以将植物样本放回装有 ClearSee™ 的微管中进行保存。
另外，用 ClearSee™ 透明化的样本亦可用荧光色素进行染色。细胞核染色时，向 ClearSee™ 中添加终浓度为 10 μg/ mL 的双苯甲酰亚胺 H33258 三盐酸盐，双苯甲亚胺 H33342 或 DAPI，细胞壁染色时，使用终浓度为 1 mg/mL，静置１小时后，更换新的 ClearSee™ ，再静置１小时后，在荧光显微镜下进行观察。
图8. 经透明化处理的拟南芥叶在明场中呈透明状态，叶绿素的红色自发荧光消失。
图8. 由于可以对整片叶进行观察，因此也可以观察到维管束内的荧光蛋白。比例尺为 200 μm。
图9. 使用 ClearSee™ 透明化的完整的雌蕊的荧光观察。
图2. 用４个颜色（蓝色，绿色，黄色，红色）的荧光蛋白标记花粉管。
图2. 根据参考文献改编转载。
图10. 使用 ClearSee™ 处理４天的拟南芥的根。
图10. 生长素应答细胞的细胞核用绿色、全身的细胞核用紫色显示。
图10■其他植物的透明化案例
使用 ClearSee™ 透明化６天后的蓝猪耳、矮牵牛、烟草、番茄、黄瓜、稻叶。
稻叶在透明化时，由于叶子的表面有蜡层，因此很难将溶液渗入组织里，通过在氯仿等有机溶剂中浸泡 10~30 秒除蜡后，开始固定的步骤。
图11. 使用 ClearSee™ 透明化的各种植物叶片（６天后）
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产品编号
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产品名称
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产品规格
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产品等级
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031-25151
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ClearSee™
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50 mL
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植物透明化用
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160-16061
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多聚jia醛
Paraformaldehyde
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100 g
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组织固定用
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162-16065
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多聚jia醛
Paraformaldehyde
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500 g
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组织固定用
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167-25981
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16w/v% 低聚jia醛溶液
16w/v% Paraformaldehyde Solution, Methanol free
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1 mL×10A
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电子显微镜用
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163-25983
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16w/v% 低聚jia醛溶液
16w/v% Paraformaldehyde Solution, Methanol free
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10 mL×10A
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电子显微镜用
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植物科学新技术 植物透明化试剂
