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上海金畔生物科技有限公司供应膜再生液 Jinpan P0380量大优惠，咨询 ：

 膜再生液 Jinpan P0380

上海金畔生物科技有限公司供应膜再生液 Jinpan P0380量大优惠，咨询 ：      2743691513

膜再生液有些公司叫做一抗二抗去除液，用于对同一张膜进行多次 Western Blot检测。

在室温条件下，将用过的膜浸泡在膜再生液
30-60分钟，可在不影响抗原蛋白的情况下清除膜上结合的抗体。随后，可以使用不同的抗体
进行下一轮 Western Blot实验，因而可利用同一张膜进行多次蛋白检测。适宜从少量样品多次
检测多种不同蛋白质。即使样品量并不匮乏，采用这一策略多次检测同一张膜上的蛋白，能省去
给药处理、蛋白电泳和膜转移等耗费性步骤。
本产品特点是：无毒无害，室温下使用，室温下保存；可对同一张膜进行 10次以上的
Western Blot检测。 适用于清除硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上结合的抗体，不影响抗原蛋白。

1、膜再生的实质是在不影响膜上结合的抗原的条件下，将与抗原分子结合的一抗和二抗洗脱下来。有许多因素影响抗体从膜洗脱，如膜类型、抗体类型和浓度及其与抗原结合特性。按下面的说明优化再生液中孵育膜的时间至关重要。
2、确定膜上抗体是否去除与优化再生液孵育膜的时间：用 ECL 荧光工作液孵育再生后的膜约 1
分钟，然后进行 X光胶片曝光并显影，可确定膜上的抗体是否*去除。如胶片上显示条带，表
明抗体未*去除，应继续将膜浸泡在再生液中另外孵育 30-60 分钟。然后再次 ECL 检查膜上抗
体是否去除。重复此步骤直到抗体*去除并确定*孵育时间。
3、由于至今尚不清楚的原因，使用脱脂奶粉封闭的膜要比使用 BSA封闭的膜上的抗体更容易被
洗下来。因此准备进行再生的膜，应该使用脱脂奶粉而不是 BSA封闭。
4、尽量避免使用干燥保存的膜，干的膜上的抗体很难被洗干净。

上海金畔生物科技有限公司供应膜封闭液 Jinpan P0370量大优惠，咨询 ：

膜封闭液 Jinpan P0370

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我公司生产的Western Blot膜封闭液采用经典的脱脂奶粉加入PBS本制，加入侵。02%的叠氮钠，适于在Western Blot实验中封闭转印膜上非蛋白质结合部位，减少一抗及二抗蛋白的非特异性结合，将实验背景降到zui低。该封闭液对 Nitrocellulose、PVDF、尼龙膜等各种转印膜均有较强的封闭效果。

此试剂一般现订现生产，客房拿到手后须一个月内使用。为节省成本，本产品一般可反复使用两到三回。

上海金畔生物科技有限公司供应线粒体提取试剂盒 Jinpan P0940量大优惠，咨询 ：

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线粒体提取试剂盒使用说明

 一，试剂盒组份

二，说明

线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。

三，操作步骤

1. 样本处理

a. 组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨组织20次；

b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 × g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 10⁷个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次；

2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000× g 离心5 min；

3. 取上清，加入一新的离心管中，4℃，1000× g 再次离心5 min。

4．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底；

5. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL  Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000× g 离心5 min；

6．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；

6. 用50 -100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。

四 注意事项：
1. 为保证获得完整的线粒体，*是全程低温操作。第二是快速。第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备线粒体的zui关键环节。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。
3. 进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解线粒体。

五 储存：四周内使用可4℃储存，长期置-20℃

转速与离心力换算

G＝1.11×（10^-5）×R×[rpm]^２
G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示；

 [rpm] ^２即：转速的平方； R为半径，单位为厘米。

上海金畔生物科技有限公司供应细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 Jinpan P0914量大优惠，咨询 ：

上海金畔生物科技有限公司供应细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 Jinpan P0914量大优惠，咨询 ：      2743691513

产品简介：

1、在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份，而研究得zui多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究，例如EMSA（也称gelshift），footprinting等。
    细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒（Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit）提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
    本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。zui后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
    本试剂盒可以抽提50个样品，如果每个样品的数量为约二百万细胞或约60毫克组织。
包装清单：

2、 
保存条件：
    -20℃保存，一年有效。
注意事项：
    PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
    抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
    本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果很差。可以抽提的组织样品数通常不足100个。
    使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3、 使用说明：
1. 准备溶液：温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zui终浓度为1mM。取适当量的细胞核蛋白抽提试剂备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zui终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽zui大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，离心收集细胞，尽zui大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。（对于二百万Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为20微升或40毫克。）
5. zui高速剧烈Vortex 5秒，把细胞沉淀*悬浮并分散开。（如果细胞沉淀没有*悬浮并分散开，可以适当延长vortex时间。）
6. 冰浴10-15分钟。
7. 加入细胞浆蛋白抽提试剂B 10微升。zui高速剧烈Vortex 5秒，冰浴1分钟。
8. zui高速剧烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g离心5分钟。
9. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。（千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。）
10. 对于沉淀，*吸尽残余的上清，加入50微升添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。（不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染。）
11. zui高速剧烈Vortex 15-30秒，把细胞沉淀*悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1-2分钟再高速剧烈Vortex 15-30秒，共30分钟。
12. 4℃ 12,000-16,000g离心10分钟。
13. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存。
14. 对于新鲜组织：
    A. 把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A和B（例如200微升细胞浆蛋白抽提试剂A中加入10微升抽提试剂B）。并加入PMSF至zui终浓度为1mM配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200微升组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液，并在玻璃匀浆器内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。
    B. 匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，冰浴放置15分钟。
    C. 4℃ 1,500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中，为抽提得到的部分细胞浆蛋白。（吸上清时千万不要触及沉淀。）
    D. 对于沉淀，到了这一步已经充分匀浆，但很多细胞还没有破碎。接下去按照使用说明的步骤4开始操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，按照步骤4至步骤13抽提得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤14C中抽提得到的细胞浆蛋白合并。

上海金畔生物科技有限公司供应酵母蛋白小量提取试剂盒 Jinpan P1140量大优惠，咨询 ：

酵母蛋白小量提取试剂盒 Jinpan P1140

上海金畔生物科技有限公司供应酵母蛋白小量提取试剂盒 Jinpan P1140量大优惠，咨询 ：      2743691513

酵母蛋白小量提取试剂盒

一，试剂盒组份

二，说明

酵母蛋白小量提取试剂盒用于从酵母细胞中分提取可溶性各种蛋白。提取的蛋白可用于各种常规实验。如PAGE，Western，免疫沉淀（immunol precipitation，IP）和免疫共沉淀（co-IP）。酵母裂解液中不含任何去污剂，可用各种方法测定蛋白含量。

三，操作步骤

1.   酵母常规培养。

2.   离心收集酵母。大概50－100ul的积压体积。*弃上清。

3.   加入酵母裂解液，吹打重重悬。再次离心，弃上清（此步的目的是将酵母洗一下，也可以省掉此步）。

4.   在酵母菌中，再加入0.5ml裂解液，加入5ul PMSF，5ulβ–巯基乙醇（在通风处操作）。加入50mg左右的玻璃珠，预冷，涡流10min（每涡流1min，可以冰上冷却1min）。

5.   离心，取上清。进行下一步实验或者-70℃储存。

四，注意事项

1，不同的酵母可能须涡流时间不同，可根据实际情况延长或者缩短时间。（比如蛋白浓度高低，蛋白降解情况等。）

2，如果一个月内能够用完，可将β–巯基乙醇按照百分之一的量一次性全部加入酵母裂解液中。2－8度保存。

3，因为是采用物理方法破解酵母壁，所以对于酶等一些易失活蛋白可能并不适合。

4，为了你的实验安全，请戴手套操作。并注意通风。

上海金畔生物科技有限公司供应非变性细胞裂解缓冲液 Jinpan P0916量大优惠，咨询 ：

上海金畔生物科技有限公司供应非变性细胞裂解缓冲液 Jinpan P0916量大优惠，咨询 ：      2743691513

产品简介：

非变性细胞裂解缓冲液（Nondenaturing Lysis Buffer）内含非离子型去垢剂、盐、和蛋白磷酸酶抑制剂，能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物zui大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原–抗体结合或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。另外，有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点，这种情况应该使用非变性裂解。

    非变性细胞裂解缓冲液的主要成分为20mM Tris（pH7.5），150mM NaCl，1% Triton X-100，1% NP-40以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。
    非变性蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

包装清单：

保存条件：
    -20℃保存，一年有效。
注意事项：
    为取得*的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
    关于裂解液的选择，一方面可以参考我们生产的各种裂解液主要特点、差异，选择合适的裂解液；另一方面也需要通过一些预实验来摸索*的适合您实验条件的裂解液。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
对于培养细胞样品：
1. 融解非变性蛋白裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zui终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗）。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
   对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
   裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解非变性蛋白裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zui终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。