谷实夜蛾探针法荧光定量qPCR试剂盒50次

Helicoverpa zea谷实夜蛾探针法荧光定量qPCR试剂盒(不含内参)50次NR23-5909产品简介:
产品品牌:金畔生物
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谷实夜蛾探针法荧光定量qPCR试剂盒50次

Helicoverpa zea谷实夜蛾探针法荧光定量qPCR试剂盒(不含内参)50NR23-5909

Helicoverpa zea谷实夜蛾探针法荧光定量qPCR试剂盒(不含内参)50NR23-5909产品简介:

产品品牌:金畔生物

英文名称:Helicoverpa zea(Boddie) Probe Realtime PCR Kit (without internal control)

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谷实夜蛾探针法荧光定量qPCR试剂盒50次

本产品是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的谷实夜蛾荧光定量探针法荧光定量 RT-PCR 试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供样品 RNA 模板。

2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4. 特异性高,引物是根据谷实夜蛾高度保守区设计,不会跟其他的RNA 发生交叉反应。

5. 本产品足够 50 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。

6. 本产品只能用于科研。

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谷实夜蛾探针法荧光定量qPCR试剂盒50次

 

LAMP SARS-CoV-2 引物预混液(N/E) 货 号 #S1883S-NEB酶试剂

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 等温扩增和链置换

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产品特性

 

· 新型 SARS-CoV-2 突变体对本套引物有何影响?登陆 Primer Monitor 在线工具(更多信息),查看突变体图谱与引物匹配的最新信息。 

·  10X 浓度提供

·  靶向 SARS-CoV-2 基因组中的 N 基因和 E 基因区域

·  优化形成 2 组引物混合物,提升了 SARS-CoV-2 病毒 RNA 检测的速度和灵敏度

·  SARS-CoV-2 快速变色 LAMP 检测试剂盒(NEB #E2019)的组分之一

·  点击如下链接,查看如何使用本套引物和 WarmStart® LAMP(含UDG)试剂检测 SARS-CoV-2 病毒 RNAhttps://international.neb.com/-/media/nebus/files/application-notes/appnote_optimizing_rapid_isothermal-workflow_for_sars-cov-2_with_warmstart_lamp_with_udg.pdf?rev=1972ec224ec54ce38f58669cd791e63d 

  ·  如需自己设计 LAMP 引物,请使用 NEB LAMP Primer Design Tool

·了解 LAMP 和其它等温扩增方法,请点击https://international.neb.com/applications/dna-amplification-pcr-and-qpcr/isothermal-amplification

·  全球 LAMPgLAMP)联盟发表了一篇综述文献,全面回顾了 LAMP 及其在 COVID-19 疫情中的作用。https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8802757/

 

概述

 LAMP SARS-CoV-2 引物预混液(N/E)是一套靶向两个基因的混合引物,可识别 SARS-CoV-2 基因组中的核衣壳蛋白基因(N)和包膜蛋白基因(E)区域。包含分别靶向两个区域的 2 LAMP 引物(F3B3FIPBIPLFLB),能提高对 SARS-CoV-2 的检测能力。

 

LAMP SARS-CoV-2 引物序列(5´→ 3´

Gene N2 Primer Set

Sequence

E1-F3

TGAGTACGAACTTATGTACTCAT

E1-B3

TTCAGATTTTTAACACGAGAGT

E1-FIP

ACCACGAAAGCAAGAAAAAGAAGTTCGTTTCGGAAGAGACAG

E1-BIP

TTGCTAGTTACACTAGCCATCCTTAGGTTTTACAAGACTCACGT

E1-LF

CGCTATTAACTATTAACG

E1-LB

GCGCTTCGATTGTGTGCGT

 

Gene N2 Primer Set

Sequence

N2-F3

ACCAGGAACTAATCAGACAAG

N2-B3

GACTTGATCTTTGAAATTTGGATCT

N2-FIP

TTCCGAAGAACGCTGAAGCGGAACTGATTACAAACATTGGCC

N2-BIP

CGCATTGGCATGGAAGTCACAATTTGATGGCACCTGTGTA

N2-LF

GGGGGCAAATTGTGCAATTTG

N2-LB

CTTCGGGAACGTGGTTGACC

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 货 号 #E3019L-NEB酶试剂

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

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特性

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒用于 SARS-CoV-2 的实时 RT-PCR 检测

Ÿ   2019-nCoV_N1 2019-nCoV_N2 靶标以及人源 RNase P 基因进行多重检测,支持高通量检测流程

Ÿ   通过将 RNase P 内标的反向引物设计为跨外显子序列,降低基因组 DNA 的扩增背景

Ÿ   4X 浓度的 RT-qPCR 预混液支持更大的上样量,提高检测灵敏度

Ÿ   Luna 温启动反转录酶和热启动 Taq 酶共同提升反应特异性和功效,可在室温条件下建立体系

Ÿ   预混液中包含热敏 UDG dUTP,防止残留污染

Ÿ   支持混合样品池检测,且不影响灵敏度

Ÿ   欲了解 NEB 如何支持 COVID-19 研究,请点击 COVID-19 research,其中详述了多种 RT-qPCR 病毒检测方案

产品说明

 Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒            货   号                  #E3019L

使用 Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒,在 96 孔板上检测 94 个不同的样本。结果通过荧光通道显示。 

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒经过优化,适用于水解探针法的 SARS-CoV-2 实时 RT-PCR 检测。在同一管中,RNA 首先由反转录酶转化为 cDNA,然后使用 DNA 依赖型 DNA 聚合酶扩增 cDNA,从而可以进行 qPCR 定量。基于探针法的 qPCR / RT-qPCR 原理是利用聚合酶的 5´ → 3´ 外切酶活性,将淬灭的目标特异性探针切断发出荧光,并实时监测荧光值的增加,以测量 PCR 每个循环中的 DNA 扩增。在荧光信号显著超过背景荧光的位置,可以确定 Cq 值。Cq 值可用于评估两个或多个样品的靶基因相对丰度。

图 1Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒组分

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒            货   号                  #E3019L

图 2Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒可在一个反应中同时检测两个 基因位点和人源 RNase P 基因

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒            货   号                  #E3019L

A. SARS-CoV-2 的两组引物探针序列源于 CDC 提供,其中探针改为两种荧光标记(N1: HEX, N2: FAM)。

B. RNase P 内标包含 Cy5 标记的探针和重新设计的反向引物。该引物的跨外显子设计,避免了人基因组 DNA(含有 2.4 kb 内含子)的扩增干扰。


SARS-CoV-2 引物/探针混合物包含 SARS-CoV-2 病毒中 基因两个区域的引物和探针 [基于美国疾病控制与预防中心(CDC)提供的序列]。两条探针带有不同的荧光标记(N1: HEX;N2: FAM),可在 qPCR 仪器的两个不同通道中同时观测。为了确保检测样品的完整性和无抑制物,还包含一套用于扩增人源 RNase P 基因的内标(IC)引物和探针。该靶基因的反向引物与 CDC 的设计不同,修改为跨外显子序列,以降低残留基因组 DNA 的扩增背景。IC 的扩增可在 Cy5 通道观测。产品同时还提供阳性对照(PC)(含有 SARS-CoV-2 N 基因的质粒)。


该试剂盒包含 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液,含 UDGNEB #M3019),支持更大的上样量和混合样品池检测,对灵敏度和特异性的影响极小。该预混液包含一步法 RT-qPCR 的所有组分,和独特校对参比染料,可与多种 qPCR 仪器兼容,包括需要高 ROX 或低 ROX 参比信号的仪器。独具特色的是:预混液还包含防止残留污染的热敏 UDG 和 dUTP,以及有助于体系建立的无荧光可见示踪染料。该示踪染料与 qPCR 常用荧光基团的光谱没有重叠,因此不会干扰实时检测。

 

图 3Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒的检测下限比 TaqPath™1-Step RT-qPCR Master Mix, CG 更低

 Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒            货   号                  #E3019L

将下述两种试剂盒进行检测下限(LOD)比较:使用 Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒对 2019-nCoV_N1HEX)和 2019-nCoV_N2FAM)进行多重 RT-qPCR 检测,实验设置参照 E3019 产品说明书;使用 TaqPath 1-Step RT-qPCR Master Mix, CG 对 2019-nCoV_ N1FAM)和 2019-nCoV_N2FAM)进行单重 RT-qPCR 检测,实验设置参照美国疾控中心 2019-nCoV 实时 RT-PCR 诊断指南。实验样品:将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA 中。实验仪器为 Applied Biosystems® 7500 Fast 实时荧光定量仪 (96 孔板,20 µl 反应体系)。结果显示 Luna 试剂盒对两个靶标的检测下限为 拷贝/反应,而 TaqPath 为 10 拷贝/反应。

 

4Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒适用于纯化 RNA 的混合样品池检测

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒            货   号                  #E3019L

通过将一份 2 µl 的模拟阳性样品(10 拷贝的 Twist 合成 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat RNA)与四份 2 µl 的模拟阴性样品(仅含 10 ng Jurkat RNA)混合,制备出包含五份样品的混合样品池。将混合样品池(10 µl)与单独样品(2 µl,含 10 拷贝 N 基因和 10 ng Jurkat RNA)进行性能比较。实验仪器为 Applied Biosystems® 7500 Fast 实时荧光定量仪(96 孔板,20 µl 反应体系)N1 N2 靶标的扩增曲线显示,单独和掺入混合样品池的阳性样品 Cq 值相似。由于混合样品池中人源总 RNA 量是单独样品的 5 倍,因此正如预期,混合样品池 RNase P 基因的 Cq 值更小。

5Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒的检测下限(LOD

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒            货   号                  #E3019L 

 通过 Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒对多种 SARS-CoV-2 RNA 对照样品中的 2019-nCoV_N1(HEX)和 2019-nCoV_N2(FAM)靶标进行多重 RT-qPCR 检测,获得该试剂盒的检测下限(LOD)。实验样品:将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA 中(图 A)。两位实验人员同时使用三种仪器进行平行测试(96 孔板,20 µl 反应体系):Applied Biosystems(ABI)7500 Fast Real-Time instrument、ABI QuantStudio™ 6 Flex Real-Time PCR system,以及 Bio-Rad CFX instrument。结果显示:Twist RNA 的检测下限均为 5 拷贝/反应。此外还测试了其它样品类型(图 B):SARS-CoV-2 基因组 RNA 源自 ATCC(ATCC® VR-1986D™)、NIST(Fragment 1 – Includes SARS-CoV-2 sequence: 25949-29698 of isolate USA-WA1/2020),以及 SeraCare AccuPlex™ SARS-CoV-2 Verification Panel V2(0505-0132)。上述 RNA 均由 Monarch 总 RNA 小量提取试剂盒(NEB# T2010)提取。所有 RNA 样品均掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA,使用 ABI 7500 Fast Real-Time instrument 检测。假设 RNA 提取的回收率为 100%,则各样品检测下限为:ATCC 的 SARS-CoV-2 基因组 RNA 为 2.5 GE(genomic copy equivalent)、NIST SARS-CoV-2 测试样品为 1×107 倍稀释、SeraCare AccuPlex 样品为 15 拷贝。


6TaqPath 1-Step RT-qPCR Master Mix CG相比,Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液,含 UDG SARS-CoV-2 N2 靶标的检测性能更好

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒            货   号                  #E3019L 

 

A. 使用 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液,含 UDG 2019-nCoV_1HEX)和 2019-nCoV_N2FAM)进行单重 RT-qPCR,实验设置参照 E3019 产品说明书。B. 使用 TaqPath 1-Step RT-qPCR Master Mix, CG 2019-nCoV_N1FAM)和 2019-nCoV_N2FAM进行单重 RT-qPCR,实验设置参照美国疾控中心 2019-nCoV 实时 RT-PCR 诊断指南。实验样品:将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat RNA 中,实验评估了样品 5-log 浓度范围扩增结果。实验仪器为 Applied Biosystems® 7500 Fast 实时荧光定量仪(96 孔板,20 µl 反应体系)。在上述条件下,Luna TaqPath N1 靶标的扩增结果都很好。对于 N2 靶标,尽管 TaqPath 可检测 10 个拷贝样品,但线性度并不理想,而 Luna 线性度更好,且 Cq 值出现更早。

 


Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液,含 UDG 结合了热启动 Taq DNA 聚合酶和具有新型温启动活性的反转录酶,可通过基于适配体的可逆抑制来双重控制酶的活性,这种温控活化机制可避免热循环前的非特异引物结合和扩增,从而让室温建立体系更安全。经改造的 Luna 温启动反转录酶具有更高的热稳定性,最佳反应温度为 55°C


7Luna RT-qPCR 预混液的室温稳定性让实验流程更灵活

 

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒            货   号                  #E3019L

使用 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液,含 UDG 对2019-nCoV_N1(HEX)和 2019-nCoV_N2(FAM)进行单重(SP)和多重(MP)RT-qPCR,实验设置参照 E3019 产品说明书。使用 TaqPath 1-Step RT-qPCR Master Mix, CG 对 2019-nCoV_N1(FAM)和 2019-nCoV_N2(FAM)进行单重 RT-qPCR,实验设置参照美国疾控中心 2019-nCoV 实时 RT-PCR 诊断指南。实验样品:将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA 中,实验评估了样品 5-log 浓度范围(100,000-10 拷贝)的扩增结果。上机前,将 RT-qPCR 反应体系分别室温孵育 0、2、5、24 小时。实验仪器为 Applied Biosystems® 7500 Fast 实时荧光定量仪(96 孔板,20 µl 反应体系)。结果显示 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 预混液孵育 0-24 小时的实验结果一致,而 TaqPath 孵育 2 小时后,Cq值延迟≥1,实验效果随孵育时间的延长而下降。

SARS-CoV-2 阳性对照(N 基因) 货 号 #N2117S-NEB酶试剂

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 阳性对照品

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产品特点

·包含完整的核衣壳蛋白基因(N gene)
·含有 T7 RNA 启动子序列,可产生 RNA 转录本
·质粒骨架为 pUC19,可在大肠杆菌中增殖
·为 Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒(NEB #E3019)的组分之一
 

产品描述

 SARS-CoV-2 阳性对照(N 基因)以质粒形式提供,其中含 SARS-CoV-2 N-基因(GenBankMN908947.3),以及 T7 RNA 启动子序列,如有需要可生成 RNA 转录本。该产品用于靶向 N 基因的 SARS-CoV-2 检测方法(如:RT-qPCRLAMP 等)的验证。浓度为 1,000,000 拷贝/μl

注意:在绝对定量实验中,不建议将该阳性对照的浓度作为绝对拷贝数。

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台) 货 号 #E7658L-NEB酶试剂

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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/Ultra II DNA & RNA

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)                              收藏

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相关产品

NEBNext® ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒(Oxford Nanopore Technologies)

NEBNext® ARTIC SARS-CoV-2 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)

产品特点

简化、高效的操作流程

病毒基因组起始范围广:10 – 10000 个拷贝
提高 SARS-CoV-2 基因组覆盖度的均一性
文库制备前无需进行扩增子标准化
文库插入片段约 150 bp
适用于 2 x 75 Illumina 测序
可选用人类对照引物
提供 NEBNext 样品纯化磁珠(SPRIselect®)
接头引物可单独提供
 

概述

 目前对 SARS-CoV-2 测序的可靠性和准确性的要求日益增长,为了满足上述需求,NEB 推出 NEBNext® ARTIC 文库制备试剂盒。这些试剂盒根据 ARTIC Network(1)原始流程开发,可分别用于长片段和短片段测序。ARTIC SARS-CoV-2 测序是基于多重扩增子技术的病毒全基因组测序。

 
ARTIC SARS-CoV-2 操作流程是一种可覆盖整个病毒基因组的多重扩增子测序方法。基于此方法,NEB 开发了 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 文库制备试剂盒,并优化和创新了相关试剂。
 
NEBNext ARTIC 试剂盒包含用于 SARS-CoV-2 gRNA 的 RT-PCR 引物和试剂,以及用于下游 Illumina® 和 Oxford Nanopore Technologies® 测序的文库制备相关试剂。使用 NEB 基于测序经验数据开发的方法平衡 V3 ARTIC 引物。结合优化的 RT-PCR 试剂,该试剂盒可在较宽的拷贝数范围内提高 gRNA 扩增子的均一性。
 
无论起始量多少(10 – 10,000 个病毒基因组拷贝)都可使用同一个 RT 方案,并且在靶向扩增前无需进行标准化。使用 NEB 基于测序经验数据开发的方法平衡 V3 ARTIC 引物,以提高整个病毒基因组的扩增子覆盖度均一性。文库制备使用 NEBNext FS 试剂和工作流程,包含 cDNA 酶切打断,同时试剂量已根据 ARTIC 应用进行了调整。请注意,文库制备的接头引物需要单独购买。使用全新的 NEBNext Library PCR Master Mix 时,无论初始起始量多少,都可用相同的 PCR 循环数扩增所有的文库。
 
NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)包含 cDNA 酶切打断过程,可制备约 150 bp 插入片段的文库,适用于 2 x 75 bp 测序。如需制备更长的插入片段,选用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)(NEB #E7650)可制备约 400 bp 插入片段的文库,适用于 2 x 75 bp 测序。
 
1.(Josh Quick 2020. nCoV-2019 sequencing protocol v2 (GunIt). protocols.io https://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.bdp7i5rn).
 

产品描述

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)            货   号                  #E7658L

使用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台),提高基因组覆盖度。基因组数据可视化图(IGV)显示了 SARS-CoV-2 基因组的覆盖度。起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNA(ThermoFisher QS0639)中的 1,000 份 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝(ATCC VR-1986 和 VR-1991)。分别使用两种引物对起始样本进行多重扩增子扩增:IDT ARTIC nCoV-2019 V3 Panel(“Standard”)和 NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池,两种引物中添加或不添加 NEBNext ARTIC 人类对照引物。建库试剂为 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)。使用 MiSeq® (2 x 75 bp)测序。测定每个碱基的覆盖深度,向下抽样(seqtk)Reads 数,使用 Bowtie 2 比对至 SARS-CoV-2 参考基因组(NCBI, NC_045512)。

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)            货   号                  #E7658L

使用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台),提高每个碱基的覆盖深度。起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNA(ThermoFisher QS0639)中的 10 – 1,000 份 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝(ATCC VR-1986 和 VR-1991)。分别使用两种引物对起始样本进行多重扩增子扩增:IDT ARTIC nCoV-2019 V3 Panel(“Standard”)或 NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池。建库试剂为 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)。使用 MiSeq® (2 x 250 bp)测序。测定每个碱基的覆盖深度,向下抽样(seqtk)Reads 数,使用 Bowtie 2 比对至 SARS-CoV-2 参考基因组(NCBI, NC_045512)。
 
NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)            货   号                  #E7658L
添加人类对照引物不会降低基因组覆盖度。起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNAThermoFisher QS0639)中的 1,000 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝(ATCC VR-1986 VR-1991)。使用 NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池对起始样本进行多重扩增子扩增,引物中添加或不添加 NEBNext ARTIC 人类对照引物。建库试剂为 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)。使用 MiSeq® 2 x 75 bp)测序。基因组部分的各覆盖深度由起始量和 Reads 向下抽样至 10,000100,000500,000 1,000,000 确定。
 
NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)            货   号                  #E7658L

使用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台),提高基因组覆盖度。基因组数据可视化图(IGV)显示了 SARS-CoV-2 基因组的覆盖度。起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNAThermoFisher QS0639)中的 1,000 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝(ATCC VR-1986 VR-1991)。分别使用两种引物对起始样本进行多重扩增子扩增:QIAseq SARS-CoV-2 Primer Panel NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池。建库试剂为 QIAseqFX kit NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)。使用 MiSeq® 2 x 75 bp)测序。测定每个碱基的覆盖深度,向下抽样(seqtkReads 数,使用 Bowtie 2 比对至 SARS-CoV-2 参考基因组(NCBI, NC_045512)。

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)            货   号                  #E7658L

使用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台),提高基因组覆盖度。起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNAThermoFisher QS0639)中的 1,000 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝(ATCC VR-1986 VR-1991)。分别使用两种引物对起始样本进行多重扩增子扩增:QIAseq SARS-CoV-2 Primer Panel NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池。建库试剂为 QIAseqFX kit NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)。使用 MiSeq® 2 x 75 bp)测序。基因组部分的各覆盖深度由起始量和 Reads 向下抽样至 10,000100,000500,000 1,000,000 确定。

NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)工作流程
NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)            货   号                  #E7658L

 

 

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒(Oxford Nanopore Technologies) 货 号 #E7660L-NEB酶试剂

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Oxford Nanopore Technologies 测序平台

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒(Oxford Nanopore Technologies)                              收藏

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#E7660L
96 次反应
9,219.00

#E7660S
24 次反应
2,299.00

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相关产品

NEBNext® ARTIC SARS-CoV-2 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)

NEBNext® ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)

产品特点

简化、高效的操作流程

病毒基因组起始范围广:10 – 10000 个拷贝
使用更平衡的引物池,提高 SARS-CoV-2 基因组覆盖深度的均一性
文库插入片段约 400 bp
提供 NEBNext 样品纯化磁珠(SPRIselect®)
 

概述

目前对 SARS-CoV-2 测序的可靠性和准确性的要求日益增长,为了满足上述需求,NEB 推出 NEBNext® ARTIC 文库制备试剂盒。这些试剂盒根据 ARTIC Network(1)原始流程开发,可分别用于长片段和短片段测序。ARTIC SARS-CoV-2 测序是基于多重扩增子技术的病毒全基因组测序。
 
ARTIC SARS-CoV-2 操作流程是一种可覆盖整个病毒基因组的多重扩增子测序方法。基于此方法,NEB 开发了 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 文库制备试剂盒,并优化和创新了相关试剂。
 
NEBNext ARTIC 试剂盒包含用于 SARS-CoV-2 gRNA 的 RT-PCR 引物和试剂,以及用于下游 Illumina® 和 Oxford Nanopore Technologies® 测序的文库制备相关试剂。使用 NEB 基于测序经验数据开发的方法平衡 V3 ARTIC 引物。结合优化的 RT-PCR 试剂,该试剂盒可在较宽的拷贝数范围内提高 gRNA 扩增子的均一性。
 
无论起始量多少(10 – 10,000 个病毒基因组拷贝)都可使用同一个 RT 方案,并且在靶向扩增前无需进行标准化。使用 NEB 基于测序经验数据开发的方法平衡 V3 ARTIC 引物,以提高整个病毒基因组的扩增子覆盖度均一性。
 
NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒(Oxford Nanopore Technologies)适用于 Oxford Nanopore Technologies(ONT)测序平台,与 ONT 试剂盒一起使用可制备约 400 bp 插入片段的文库,该文库可在任意 ONT 仪器上进行测序,运行时间为 2–24 小时。
 
如需制备适用于 Illumina 测序平台的文库,选用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)(NEB #E7658)可制备约 150 bp 插入片段的文库;选用 NEBNext® ARTIC SARS-CoV-2 文库制备试剂盒(适用于 Illumina 平台)(NEB #E7650)可制备约 400 bp 插入片段的文库。
 
1.(Josh Quick 2020. nCoV-2019 sequencing protocol v2 (GunIt). protocols.io https://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.bdp7i5rn).
 

产品描述

 NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒(Oxford Nanopore Technologies)            货   号                  #E7660L

使用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒(Oxford Nanopore Technologies),完全覆盖基因组所需的 Reads 数更少。基因组数据可视化图(IGV)显示了 SARS-CoV-2 基因组的覆盖度起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNA(ThermoFisher QS0639)中的 1000 份 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝(ATCC VR-1986 和 VR-1991)。分别使用两种引物对起始样本进行多重扩增子扩增:IDT ARTIC nCoV-2019 V3 Panel(“Standard”)和 NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池。所使用的建库试剂盒如下:NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒(Oxford Nanopore Technologies)、Oxford Nanopore Technologies Native Barcoding Expansion kits 1-12(EXP-NBD104)、13-24 (EXP-NBD114)、Ligation Sequencing Kit(EXP-NBD114)、Ligation Sequencing Kit(SQK-LSK109)和 SFB Expansion Kit(EXP-SFB001)。使用 R9.4.1 flow cells 在 GridION 仪器上进行测序,并使用 ARTIC Network nCoV-19 生物信息流程分析数据。

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒(Oxford Nanopore Technologies)            货   号                  #E7660L

使用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒(Oxford Nanopore Technologies)提高基因组覆盖度。如图所示,起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNA(ThermoFisher QS0639)中的 1000 份 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝(ATCC VR-1991)。分别使用两种引物对起始样本进行多重扩增子扩增:IDT ARTIC nCoV-2019 V3 Panel 和 NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池。操作流程也分别使用两种:标准操作流程和 NEBNext 操作流程。所使用的建库试剂如下:NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒(Oxford Nanopore Technologies)、Oxford Nanopore Technologies Native Barcoding Expansion kits 1-12(EXP-NBD104)、13-24 (EXP-NBD114)、Ligation Sequencing Kit(EXP-NBD114)、Ligation Sequencing Kit(SQK-LSK109)和 SFB Expansion Kit(EXP-SFB001)。使用 R9.4.1 flow cells 在 GridION 仪器上进行测序。Reads 数被向下抽样(seqtk)至指定值,并使用 ARTIC Network nCoV-19 生物信息流程生成共有序列基因组。使用 Quast 将共有序列基因组与 SARS-CoV-2 参考序列进行比对获得基因组覆盖率。在覆盖率达到 100 倍时共有序列中仅缺失了最 5′ 和 3′ 的区域(约 120 个核苷酸)。

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒(Oxford Nanopore Technologies)            货   号                  #E7660L

 

SARS-CoV-2 RT-PCR 扩增性能优越。起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNAThermoFisher QS0639)中的 10 – 10,000 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝(ATCC VR-1986 VR-1991)。使用 NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池对起始样本进行多重扩增子扩增。使用 Qubit™ dsDNA BR Assay KitThermoFisher Q32850)测定平均扩增子产量。

适用于 Oxford Nanopore Technologies 测序的 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 工作流程

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒(Oxford Nanopore Technologies)            货   号                  #E7660L

天恩泽SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法

天恩泽 SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 15-81920y,产品简介:
产品品牌:天恩泽
产品名称:SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
产品货号:15-81920y
产品规格:50次
天恩泽SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法

天恩泽 SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法荧光定量

RT-PCR试剂盒 15-81920y

我们上海金畔生物公司作为天恩泽公司的代理商,先简单介绍一下天恩泽公司:

北京天恩泽公司的目标是研发出技术先进、质量稳定、价格合理的试剂精品。公司的创立宗旨是技术至上、质量至上、服务至上,公司的产品研发团队均为高学历并在海外有长期的科研经验;公司的管理团队已在行业内拥有超过20年管理经验;同样,公司的运营团队也有丰富的执行经验。

北京天恩泽公司充分了解客户的需求,并努力创新以满足客户不断发展的需求。我们将与我们的客户共同成长,成为生物技术领域中zhuoyue产品和服务的jijia提供者。

天恩泽SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法

DNAout、RNAout、Erasol、天净沙、克必隆、归去来、好亦多均为天恩泽基因注册商标(试剂类)。

我们上海金畔生物科技有限公司作为天恩泽公司的代理,为客户提供,正规进口,保证原装正品,货期稳定,折扣好的服务标准。

天恩泽 SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 15-81920y,产品简介:

产品品牌:天恩泽

产品名称:SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

英文名称:SARS-CoV-2 N Gene Probe qRT-PCR Kit

产品货号:15-81920y

产品规格:50次

产品价格:4490元

天恩泽 SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 15-81920y,产品说明:

2019病毒,即“SARS-CoV-2”,因2019年武汉病毒性肺炎病 例而被发现,2020 年 1月12 日被世界卫生组织命名。冠状病毒是一个大型病 毒家族,病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。人感染了冠 状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病 例中,感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭,甚至死亡。

1. 即开即用,用户只需要提供样品RNA模板。

2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4. 特异性高,引物是根据SARS-CoV-2冠状病毒N基因保守区设计,具有较 高特异性。

5. 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应。

6. 本产品只能用于科研。

规格及成分

成分

编号

十孔盒包装

探针法qRT-PCR 缓冲液

190504a

500μL(蓝盖)

探针法qRT-PCR 酶混合液

190504b

100μL(红盖)

荧光PCR 模板稀释液

180701

1 mL(黄盖)

SARS-CoV-2冠状病毒N基因探 针法qRT-PCR 引物混合液

15-81920yw

100 μL(白盖)

SARS-CoV-2冠状病毒N基因 qRT-PCR 探针

15-81920pb

50 μL(棕色管)

SARS-CoV-2冠状病毒N基因探 针法qRT-PCR 阳性对照 (1×10E8拷贝/μL)

60908-81920pc

50 μL(黄盖)

使用手册

15-81920sc

1份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。

自备试剂 样品RNA。

天恩泽 SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 15-81920y,使用方法:

  • 稀释标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL

这6个10倍稀释度为例)。 由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能 污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNApian段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。

2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光RT-PCR 模板稀释液,可以用带芯枪 头,下同)。

3. 在7号管中加入5 μL1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震 荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

 4. 换枪头,在6号管中加入5 μL1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头,在5号管中加入5 μL1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品RNA的制备

7. 如果有N个样品,可以设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性 对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为 PC。另外用水作为NC。

8. 用自选方法纯化样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂 盒兼容。

三、Probe qRT-PCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)

 9. 如果做定量分析并且只做1次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中N+2 个 用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记N+4个PCR 管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR 阴性对照(用 水做模板),1个用于 PCR 阳性对照(用第 4号管的阳性对照稀释液做模 板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设 置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好 后加):

成分

样品管 N+2个

RT-PCR 阴性对照 管

标准曲线 样品管 (2-7管)

探针法qRT-PCR 缓冲液

各10 μL

10 μL

各10 μL

探针法qRT-PCR 酶混合液

各2 μL

2 μL

各2 μL

SARS-CoV-2冠状病毒N基因 qRT-PCR 探针

各1 μL

1 μL

各1 μL

SARS-CoV-2冠状病毒 N基因探 针法qRT-PCR 引物混合液

各2 μL

2 μL

各2 μL

待测样品RNA模板

各5 μL

超纯水

5 μL

第7步所得标准曲线样品稀释液 (2-7号)

各5 μL(2号 样到2号管, 3号样到3号 管…)

11. 盖上盖子后上机,按下面参数进行qRT-PCR:

过程

温度

时间

逆转录

50℃

30 min

预变性

94℃

10 min

qRT-PCR 反应 (40个循环)

94℃

15 sec

60℃

1 min(采集FAM通道的荧光信号)

五、数据处理

12. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA浓度的log值,再推算出其浓度。

13. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct 必须大 于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该 小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小 于或等于37则为阳性。如果在 37-40 之间,则重复一次。若重复结果 Ct 值小于40,扩增曲线有明显起峰,该样本判断为阳性,否则为阴性。

关联产品 SARS-CoV-2冠状病毒N基因可视化LAMP检测试剂盒

以下是天恩泽品牌部分热销产品,如需其他品牌产品请咨询本店客服:

品牌

产品货号

货品名称

规格

天恩泽

200101-50

第二代病毒采运试剂盒(低敏型)原拭子病毒采运试剂盒,核酸诊断用

50次/盒

天恩泽

200201-50

第三代免提核酸提取病毒采运试剂盒

50次/盒

天恩泽

200601-50

荧光及可视化LAMP试剂盒

50次/盒

天恩泽

200603-50

荧光及可视化RT-LAMP试剂盒

50次/盒

天恩泽

200108-2.5L

xinguan病毒灭活液A型

2.5L/瓶

天恩泽

91103-250

非冻型拭子病毒保存液

250ml/瓶

天恩泽

15-81920

SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

50次/盒

天恩泽

16-81920

SARS-CoV-2冠状病毒N基因荧光及可视化RT-LAMP试剂盒

50次/盒

天恩泽

15-23000

African Swine Fever Virus(ASFV)非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

50次/盒

天恩泽

16-23000

African Swine Fever Virus(ASFV)非洲猪瘟病毒LAMP试剂盒

50次/盒

天恩泽

15-29420

Yersinia pestis鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)探针法荧光定量PCR试剂盒

50次/盒

天恩泽

71201-50

柱式动物RNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

71001-50

柱式病毒RNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

60705-50

一管式植物DNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

3070-100

动物RNA提取试剂盒(TRIzol)

100mL/瓶

天恩泽

81027-50

TRIzol伴侣

50次/套

天恩泽

70701-50

柱式病毒DNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

3674-50

一管式病毒DNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

90404-50

柱式植物RNA提取试剂盒2.0

50次/套

天恩泽

60802-50

柱式细菌DNA提取试剂盒

50次/盒

天恩泽

71203-50

柱式植物RNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

60602-50

柱式植物DNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

90315-250

非冻型尿液DNA保存液

250mL/瓶

天恩泽

3660-250

非冻型组织DNA保存液

250mL/瓶

天恩泽

3060-250

非冻型组织RNA保存液

250m/瓶

天恩泽

90805-10

即用型PCR试剂盒3.0

1ml×10/盒

天恩泽

90708-1.5

即用型高保真PCR试剂盒

1.5mL/瓶

天恩泽

90408-1

2X 染料法荧光定量PCR Mix(2x SYBR qPCR Mix)

1ml/管

天恩泽

190303-1

2X 探针法qPCR Mix (TaqMan探针法荧光定量PCR试剂盒)

1ml/管

天恩泽

101005-100

即用型易错PCR试剂盒

100次/套

天恩泽

160903-100

可调式易错PCR试剂盒

100次/套

天恩泽

3090-250

天净沙RNase清除剂A型(原固相RNase清除剂)

250mL/瓶

天恩泽

3091-1.5

天净沙RNase清除剂B型(原液相RNase清除剂)

1.5mL/套

天恩泽

140648-250

PCR污染清除剂

250 mL/瓶

天恩泽

70902-1.5

PCR级甜菜碱溶液,5M

1.5mL/管

天恩泽

100805B-250

Tris饱和酚-lvfang-yiwuchun混合液(DNA提取用)

250ml/瓶

天恩泽

130502-50

无内毒素水

50mL/瓶

天恩泽

160251-250

4%中性甲醛固定液

250mL/瓶

天恩泽

100302-100

包涵体蛋白溶解及复性套装

100次/次

天恩泽

200604

核酸释放剂(DNA-RNA通用型)

300次/盒

天恩泽

61202-10

天净沙核酸释放剂

10mL/瓶

天恩泽

70303-1.5

绿如蓝核酸染料(UV)

1.5mL/管

天恩泽

70503

DNA电泳分子量标准系列

50次/管

天恩泽

小师弟

高压快速电泳预制胶

10块/盒

 天恩泽SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法

 

天恩泽SARS-CoV-2冠状病毒N基因荧光

天恩泽SARS-CoV-2冠状病毒N基因荧光及可视化RT-LAMP试剂盒 16-81920Ny,产品简介:
产品品牌:天恩泽
产品名称:SARS-CoV-2冠状病毒N基因荧光及可视化RT-LAMP试剂盒
英文名称:SARS-CoV-2 N Gene Fluorescent and Colorimetric RT-LAMP Kit
产品货号:16-81920Ny
产品规格:5

天恩泽SARS-CoV-2冠状病毒N基因荧光及可视化

RT-LAMP试剂盒 16-81920Ny

我们上海金畔生物公司作为天恩泽公司的代理商,先简单介绍一下天恩泽公司:

北京天恩泽公司的目标是研发出技术先进、质量稳定、价格合理的试剂精品。公司的创立宗旨是技术至上、质量至上、服务至上,公司的产品研发团队均为高学历并在海外有长期的科研经验;公司的管理团队已在行业内拥有超过20年管理经验;同样,公司的运营团队也有丰富的执行经验。

北京天恩泽公司充分了解客户的需求,并努力创新以满足客户不断发展的需求。我们将与我们的客户共同成长,成为生物技术领域中zhuoyue产品和服务的jijia提供者

DNAout、RNAout、Erasol、天净沙、克必隆、归去来、好亦多均为天恩泽基因注册商标(试剂类)。

我们上海金畔生物科技有限公司作为天恩泽公司的代理,为客户提供,正规进口,保证原装正品,货期稳定,折扣好的服务标准。

天恩泽SARS-CoV-2冠状病毒N基因荧光及可视化RT-LAMP试剂盒 16-81920Ny,产品简介:

产品品牌:天恩泽

产品名称:SARS-CoV-2冠状病毒N基因荧光及可视化RT-LAMP试剂盒

英文名称:SARS-CoV-2 N Gene Fluorescent and Colorimetric RT-LAMP Kit

产品货号:16-81920Ny

产品规格:50次

产品价格:3390

天恩泽SARS-CoV-2冠状病毒N基因荧光及可视化RT-LAMP试剂盒 16-81920Ny,产品说明:

2019 病毒,即 SARS-CoV-2,因 2019 年武汉病毒性肺炎病例 而被发现,2020年1月12日被世界卫生组织命名。冠状病毒是一个大型病毒 家族,病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。人感染了冠 状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重 病例中,感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭,甚至死亡。常规的 检测方法是荧光定量 RT-PCR,但该方法操作复杂,灵敏度度不是,容易 产生假阴性。为解决此问题,本公司开发了基于环介导等温扩增(LAMP)的 产品,专门用于检测病毒的N基因。它具有下列特点:

1. 一般60分钟内出结果(取决于靶分子浓度),比PCR快约1小时。

2. 对20 μL的反应体系,大样品加样量达到14 μL。

3. 含可见光和荧光染料,既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果, 也可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。

4. 内含的dUTP-UNG可防交叉污染。

5. 特异性比PCR高,因为LAMP扩增使用4-6条引物而不是两条。

6. 假阴性率低。

7. 提供无传染性的阳性对照,便于分析实验结果。

8. 只可用于科研,只可进行定性检测,不能用于定量检测。

9. 本产品足够50次20 μL体系的LAMP 扩增和检测反应。

规格及成分

成  份

编号

五孔盒塑料盒包装

4×荧光及可视化RT-LAMP MagicMix

200601a

250 μL(绿盖)

20×SARS-CoV-2冠状病毒N 基因RT-LAMP引物混合液

16-81920Nyw

50 μL(白盖)

SARS-CoV-2冠状病毒N基因 RT-LAMP阳性对照 (1×10E3拷贝/μL)

60908-81920Npc

150 μL(黄盖)

超纯水

100935

1 mL(亮黄盖)

使用手册

16-81920Nsc

1份

|“运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照zhineng单独放置,不要污染其 他试剂。

自备试剂 待测样品。

使用方法 准备工作:如果使用水浴锅或金属浴,需要在实验启动前打开并调到65℃。如 果用金属浴,还必须在孔中加水以填充金属孔和反应管间的空隙。本公司发现 很多水浴锅或金属浴温度不准,故建议先用阳性对照和阴性对照测试所用仪器 在60℃、62.5℃、65℃、67.5℃和70℃五个温度下扩增效果,选择阳性和阴性颜色差异大的温度进行扩增。

一、样品RNA的制备

1. 用自选方法纯化样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。

 2. 如果有 N 个样品,则至少需要做 N+2 个样品制备,包括一个制备阳性对 照(制备时加入自备的跟要检测的靶分子相同的阳性对照模板,一起经历 提取过程)和一个制备阴性对照(用水替代样品)。后 N+2 个样品一起 进行RNA 提取操作,得到N+2个RNA样品。

 二、荧光及可视化RT-LAMP扩增及检测(20μL体系)

3. 反应设置:如果有N+2个RNA纯化样品,则设置N+4个RT-LAMP 扩增,增加 RT-LAMP 阴性对照和 RT-LAMP 阳性对照各 1 个。在 N+4 个0.2mL PCR管中加入下列成分:

成分

N+2个 样品管

RT-LAMP 阴性对照

RT-LAMP 阳性对照

4×荧光及可视化 RT-LAMP MagicMix

各5 μL

5 μL

 

5 μL

20 × 病毒 N 基因 RT-LAMP引物混合液

各1 μL

1 μL

1 μL

N+2个样品RNA

各14 μL

超纯水

 

14 μL

4 μL

试剂盒提供的阳性对照 (1×10E3拷贝/μL)

10 μL

4. 置混匀后进行扩增。由于本产品含双染料,可以根据实验室条件选择下列 两种方式进行扩增和检测。

5. 如果使用金属浴或水浴,则必须先在每个反应管中加30 μL石蜡油,否则 保温期间反应体系的水分会蒸发,影响反应效率。65℃保温90分钟。

6. 如果使用荧光定量PCR仪:设聚合温度65℃,1次循环1分钟,90个循 环,每分钟在FAM通道采集一次荧光信号。

三、结果分析及解读

7. 如果是用水浴或金属浴进行的扩增,反应结束后只能肉眼判断结果。将反 应管放置在白色背景(如白纸)前观察。扩增阳性对照管内反应液将呈现 蓝色,无模板和无引物的阴性对照将呈浅蓝色。如果扩增阳性对照管内反 应液不呈现蓝色,或无模板和无引物的阴性对照任何一个呈现蓝色,则说明试剂有问题,实验无效。请跟厂家联系。

8. 如果实验有效,则样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明有扩增,如果 接近无模板和无引物的阴性对照,则说明无扩增。反应结果示例如下(9 为阴性,10为阳性)

 天恩泽SARS-CoV-2冠状病毒N基因荧光

9. 反应结束后,如是用荧光 PCR 仪扩增,则可分析扩增曲线和 Ct。试剂盒 提供的阳性对照的Ct将小于60,如果大于60,说明试剂可能失效,需跟 厂家联系。无模板阴性对照和无引物阴性对照的 Ct将大于60。如果小于 60,则说明试剂或环境被污染,需重复实验或跟厂家联系。如果对照结果 正常,说明实验有效,再分析样品。样品的 Ct 在 60 以下的为阳性,60 以上的为阴性。 10. 当实时荧光检测和可视化检测同时使用时,如果不一致,以实时荧光LAMP 的数据为准。一般可视化结果滞后实时荧光检测结果20-30分钟,也就是 说,在 qPCR 仪上第 30 分钟时呈现阳性的样品,其颜色变化在第 50-60 分钟时才能观察到。

关联产品 SARS-CoV-2冠状病毒N基因染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

以下是天恩泽品牌部分热销产品,如需其他品牌产品请咨询本店客服:

品牌

产品货号

货品名称

规格

天恩泽

200101-50

第二代病毒采运试剂盒(低敏型)原拭子病毒采运试剂盒,核酸诊断用

50次/盒

天恩泽

200201-50

第三代免提核酸提取病毒采运试剂盒

50次/盒

天恩泽

200601-50

荧光及可视化LAMP试剂盒

50次/盒

天恩泽

200603-50

荧光及可视化RT-LAMP试剂盒

50次/盒

天恩泽

200108-2.5L

xinguan病毒灭活液A型

2.5L/瓶

天恩泽

91103-250

非冻型拭子病毒保存液

250ml/瓶

天恩泽

15-81920

SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

50次/盒

天恩泽

16-81920

SARS-CoV-2冠状病毒N基因荧光及可视化RT-LAMP试剂盒

50次/盒

天恩泽

15-23000

African Swine Fever Virus(ASFV)非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

50次/盒

天恩泽

16-23000

African Swine Fever Virus(ASFV)非洲猪瘟病毒LAMP试剂盒

50次/盒

天恩泽

15-29420

Yersinia pestis鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)探针法荧光定量PCR试剂盒

50次/盒

天恩泽

71201-50

柱式动物RNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

71001-50

柱式病毒RNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

60705-50

一管式植物DNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

3070-100

动物RNA提取试剂盒(TRIzol)

100mL/瓶

天恩泽

81027-50

TRIzol伴侣

50次/套

天恩泽

70701-50

柱式病毒DNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

3674-50

一管式病毒DNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

90404-50

柱式植物RNA提取试剂盒2.0

50次/套

天恩泽

60802-50

柱式细菌DNA提取试剂盒

50次/盒

天恩泽

71203-50

柱式植物RNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

60602-50

柱式植物DNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

90315-250

非冻型尿液DNA保存液

250mL/瓶

天恩泽

3660-250

非冻型组织DNA保存液

250mL/瓶

天恩泽

3060-250

非冻型组织RNA保存液

250m/瓶

天恩泽

90805-10

即用型PCR试剂盒3.0

1ml×10/盒

天恩泽

90708-1.5

即用型高保真PCR试剂盒

1.5mL/瓶

天恩泽

90408-1

2X 染料法荧光定量PCR Mix(2x SYBR qPCR Mix)

1ml/管

天恩泽

190303-1

2X 探针法qPCR Mix (TaqMan探针法荧光定量PCR试剂盒)

1ml/管

天恩泽

101005-100

即用型易错PCR试剂盒

100次/套

天恩泽

160903-100

可调式易错PCR试剂盒

100次/套

天恩泽

3090-250

天净沙RNase清除剂A型(原固相RNase清除剂)

250mL/瓶

天恩泽

3091-1.5

天净沙RNase清除剂B型(原液相RNase清除剂)

1.5mL/套

天恩泽

140648-250

PCR污染清除剂

250 mL/瓶

天恩泽

70902-1.5

PCR级甜菜碱溶液,5M

1.5mL/管

天恩泽

100805B-250

Tris饱和酚-lvfang-yiwuchun混合液(DNA提取用)

250ml/瓶

天恩泽

130502-50

无内毒素水

50mL/瓶

天恩泽

160251-250

4%中性甲醛固定液

250mL/瓶

天恩泽

100302-100

包涵体蛋白溶解及复性套装

100次/次

天恩泽

200604

核酸释放剂(DNA-RNA通用型)

300次/盒

天恩泽

61202-10

天净沙核酸释放剂

10mL/瓶

天恩泽

70303-1.5

绿如蓝核酸染料(UV)

1.5mL/管

天恩泽

70503

DNA电泳分子量标准系列

50次/管

天恩泽

小师弟

高压快速电泳预制胶

10块/盒