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Wako,质谱级赖氨酰肽链内切酶

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125-05061，质谱级赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase®产品简介：
产品品牌：Wako
产品名称：质谱级赖氨酰肽链内切酶LysylEndopeptidase®
产品货号：125-05061
产品规格：20 ug×5
质谱级赖氨酰肽链内切酶

125-05061，质谱级赖氨酰肽链内切meiLysyl Endopeptidase®

125-05061，质谱级赖氨酰肽链内切meiLysyl Endopeptidase®产品简介：

产品品牌：Wako

产品名称：质谱级赖氨酰肽链内切meiLysylEndopeptidase®

产品货号：125-05061

产品规格：20 ug×5

Wako,质谱级赖氨酰肽链内切酶

　本产品是质谱分析前处理时常用的蛋白分解mei即赖氨酰肽链内切mei，该mei可以特异性切除赖氨suan基团C末端的多肽，可用于蛋白测序分析和 Lys-X 化合物的mei合成。若同时使用赖氨酰肽链内切mei和胰mei，可更好地切断赖氨suan基团的多肽，增加多肽的数量。产品已按照使用习惯做成小包装，是方便使用的冷冻干燥品。20 μg/支可用于100-200个样品的凝胶内消化。

来源：细菌

外观：冻干粉（包含２ mmol/L Tris-HCl 缓冲液，pH８）

活性：0.03～0.07 AU/vial

分子量：27,000（琼脂糖过滤），30,000（SDS-PAGE）

溶解性：溶于水或缓冲液

稳定性：溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 缓冲液中，可在４℃稳定保存２年；在 pH 值 6.0-11.0、30℃时能稳定保存，但温度超过50℃时不稳定。

最适pH值：9.0~9.5

等电点：6.9~7.0

底物特异性：

可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA

抑制剂：DFP、PMSF、TLCK

◆特点

●  高特异性、高蛋白质消化率、适用于蛋白质谱分析

●  提高裂解效率、增加肽段数量

●  根据使用量特意制备小包装，方便使用

◆应用

　　分别采用胰蛋白mei（Tp）、赖氨酰肽链内切mei（Lys-C）和 Tp与Lys-C 联用进行胶内mei切的效果比较。

　　牛血清蛋白 BSA 的条带（100 ng）通过 SDS-PAGE 获得，然后分别用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 进行mei切，再用 MALDI-TOFMS 法进行分析。

　　这些蛋白mei的实验效果见下表。

表 1：Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的结果对照

这些结果表明 Lys-C mei解的错误裂解率*低。Tp mei解时加入 Lys-C 后，错误裂解率有所降低，同时，可以鉴定出更多的多肽。

Tp

Lys-C

Lys-C+Tp

裂解位点

精氨suan和赖氨suan的Ｃ端

赖氨suan的Ｃ端

精氨suan和赖氨suan的Ｃ端

错误裂解率

(错误裂解所占比例  )

多（８%）

很少（０%）

少（３%）

鉴定出的多肽数量

１７

１９

２２

Wako,质谱级赖氨酰肽链内切酶

胰蛋白mei（Tp）（图 ａ）和赖氨酰肽链内切mei（Lys-C）+Tp（ 图 ｂ）mei切后的质谱结果对照图。

Lys-C+Tp mei切后，可以在 m/z=2000 时得到吸收峰，而单独的 Tp mei切在 m/z=2000 时没有吸收峰。该结果表明 Lys-C 可以提高测序覆盖度。

( 数据由大阪医疗中心和妇婴健康研究所Ｙ. Wada 博士提供 ）

赖氨酰肽链内切mei

赖氨酰肽链内切mei，最初由 Masaki 等人从土壤细菌中分离得到。该mei可以特异性剪切赖氨suan残基Ｃ末端和Ｓ–氨乙基半胱氨suan残基的肽键，用于蛋白测序和 Lys-X 化合物的mei催化合成。该mei稳定性高，在４Ｍ尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育６小时之后，仍然拥有完整的生物活性。

外观

 冻干粉（包含ca. 10% Tris-HCl buffer，pH 8）

活性

 见包装

分子量

 27,000（凝胶过滤）；30,000 (SDS-PAGE)

溶解性

 易溶于水或缓冲液

最佳pH

 9.0-9.5（酰胺mei的最佳活性 pH）

等电点

 6.9-7.0

抑制剂

DFP、PMSF、TLCK

来源

 细菌

稳定性

　溶于pH 值 5.0-12.0 的缓冲液中，可于４℃稳定保存。溶于pH 值 6.0-11.0 的缓冲液中，可于30℃稳

　定保存，但是50℃及以上不稳定。

单位定义

　一单位酰胺mei（AU）指在30℃ pH 9.5 时每分钟产生１ μmol 对硝基苯胺所需的mei量。

底物特异性

　水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA

　非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA

产品编号

产品名称

产品规格

产品等级

Wako 125-05061

Lysyl Endopeptidase®, MS Grade
赖氨酰肽链内切mei，MS级

20 μg×5

质谱级

Wako,质谱级赖氨酰肽链内切酶

核酸内切酶 III（Nth） 货 号 #M0268S-NEB酶试剂

发表于由

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核酸内切酶 III（Nth） 货 号 #M0268S 核酸内切酶 III（Nth） 货 号 #M0268S 核酸内切酶 III（Nth） 货 号 #M0268S 核酸内切酶 III（Nth） 货 号 #M0268S 核酸内切酶 III（Nth） 货 号 #M0268S

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特性

 单细胞凝胶电泳（彗星试验）
 碱性析出
 碱解旋 

概述

E. coli 核酸内切酶 III（Nth）既有 N-糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性。N-糖基化酶活性可释放双链 DNA 上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶（AP）位点。AP-裂解酶活性则切割 AP 位点的 3´ 端，产生一个 5´ 磷酸和一个 3´ 磷酸-α,β不饱和醛。

被核酸内切酶 III 识别并切除的受损碱基包括：尿素、5,6-二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二羟基胸腺嘧啶和甲基羟丙二酰脲。 

来源

克隆有 nth 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X Endonuclease III（Nth）反应缓冲液
[20 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，1 mM DTT（pH 8.0 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。 

质保声明

核酸内切酶 III（Nth）经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请联系我们。  

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能切割 1 pmol 含一个 AP 位点* 的 34 bp 寡核苷酸双链所需要的酶量。单位活性检测条件请联系我们。
* AP 位点的创建方法如下：37℃ 条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG） 处理 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 34 bp 寡核苷酸双链 2 分钟。
彗星试验的推荐稀释倍数：1:104～1:105。详细步骤见  

浓度

10,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

Tma 核酸内切酶 III 货 号 #M0291S-NEB酶试剂

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Tma 核酸内切酶 III 货 号 #M0291S Tma 核酸内切酶 III 货 号 #M0291S Tma 核酸内切酶 III 货 号 #M0291S Tma 核酸内切酶 III 货 号 #M0291S Tma 核酸内切酶 III 货 号 #M0291S

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特性

 碱性析出
 碱解旋 

概述

该酶为 E. coli 核酸内切酶 III（Nth）的热稳定同源蛋白。既有 N-糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性。N-糖基化酶活性可释放双链 DNA 上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶（AP）位点。AP-裂解酶活性随后对该位点进行切割。
Tma 核酸内切酶 III 识别 DNA 上的无碱基位点、5,6 二羟基胸腺嘧啶和胸腺嘧啶乙二醇。 

来源

重组 E. coli 菌株，基因克隆自海栖热袍菌（Thermotoga maritima）。 

反应条件

1X ThermoPol 反应缓冲液
[10 mM KCl，20 mM Tris-HCl，10 mM (NH4)2SO4，2 mM MgSO4，0.1% Trition X-100（pH 8.8 @ 25℃）]，65℃ 温育。 

质保声明

Tma 核酸内切酶 III 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。  

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，65℃ 条件下，1 小时能切割 1 pmol 含一个 AP 位点* 的 60 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量。单位活性检测条件请联系我们。
*AP 位点的创建方法如下：37℃ 条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）处理 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 60 mer 寡核苷酸双链 2 分钟。 

浓度

10,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

Tth 核酸内切酶 IV 货 号 #M0294S-NEB酶试剂

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Tth 核酸内切酶 IV                              收藏

Tth 核酸内切酶 IV 货 号 #M0294S Tth 核酸内切酶 IV 货 号 #M0294S Tth 核酸内切酶 IV 货 号 #M0294S Tth 核酸内切酶 IV 货 号 #M0294S Tth 核酸内切酶 IV 货 号 #M0294S

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特性

 耐热
 碱洗脱
 碱解旋

概述

Tth 核酸内切酶 IV 是一种热稳定的脱嘌呤/脱嘧啶（AP）核酸内切酶。该酶切割 AP 位点 5´ 端的第一个磷酸二酯键，产生 3´ 羟基和 5´ 脱氧核糖磷酸末端。该酶也具有 3´ 二酯酶活性。 

来源

克隆有嗜热栖热菌（Thermus thermophilus）endonuclease IV 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X ThermoPol 反应缓冲液
[10 mM KCl，20 mM Tris-HCl，10 mM (NH4)2SO4，2 mM MgSO4，0.1% Trition X-100（pH 8.8 @ 25℃）]，65℃ 温育。 

质保声明

Tth 核酸内切酶 IV 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请联系我们。 www.neb.com 或 www.neb-china.com 的产品专栏。 

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，65℃ 条件下,1 小时能切割 1 pmol 含一个 AP 位点* 的 60 bp 寡核苷酸双链所需要的酶量。详情请联系我们。
* AP 位点的创建方法如下：37℃ 条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）处理 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 60 mer 寡核苷酸双链 2 分钟。 

浓度

10,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

核酸内切酶 VIII 货 号 #M0299L-NEB酶试剂

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核酸内切酶 VIII                              收藏

核酸内切酶 VIII 货 号 #M0299L 核酸内切酶 VIII 货 号 #M0299L 核酸内切酶 VIII 货 号 #M0299L 核酸内切酶 VIII 货 号 #M0299L 核酸内切酶 VIII 货 号 #M0299L

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829.00
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特性

 单细胞凝胶电泳（彗星试验）
 碱洗脱
 碱解旋 

概述

大肠杆菌核酸内切酶 VIII 既有 N-糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性。N-糖基化酶活性可释放双链 DNA 上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶（AP）位点。AP-裂解酶活性则分别在 AP 位点的 3´ 和 5´ 端切割磷酸二酯键，产生 5´ 磷酸和 3´ 磷酸末端。能被核酸内切酶 VIII 识别并切除的受损碱基包括：尿素、5,6-二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二氢胸腺嘧啶和甲基羟丙二酰脲 。尽管核酸内切酶 VIII 与核酸内切酶 III 的活性相似，但核酸内切酶 VIII 具有 β 和 δ 裂解酶活性，而核酸内切酶 III 只有 β 裂解酶活性。 

来源

克隆有 nei 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X Endonuclease VIII 反应缓冲液
[10 mM Tris-HCl，75 mM NaCl，1 mM EDTA（pH 8.0 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活：75℃ 加热 10 分钟。 

质保声明

核酸内切酶 VIII 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。  

单位定义

1 单位指在 10 μl 缓冲液体系中，37℃ 条件下，1 小时内能够切割 1 pmol 含一个 AP 位点* 的 34 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量。单位活性检测条件请联系我们。
*AP 位点的创建方法如下：37℃ 条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）处理 10 pmol 含单一尿嘧啶碱基的 34 mer 寡核苷酸双链 2 分钟。 

彗星试验的推荐稀释倍数

1:104～1:105。详细步骤请联系我们。  

浓度

10,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

T7 核酸内切酶 I 货 号 #M0302L-NEB酶试剂

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T7 核酸内切酶 I                              收藏

T7 核酸内切酶 I 货 号 #M0302L T7 核酸内切酶 I 货 号 #M0302L T7 核酸内切酶 I 货 号 #M0302L T7 核酸内切酶 I 货 号 #M0302L T7 核酸内切酶 I 货 号 #M0302L

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839.00
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特性

 识别错配 DNA
 分解四方向交叉 DNA 或分支 DNA
 检测或切割异源二聚体 DNA 和切刻 DNA
 随机切割线性 DNA 进行 shot-gun 克隆

概述

T7 核酸内切酶 I 识别并切割不完全配对 DNA、十字型结构 DNA、Holliday 结构或交叉 DNA、异源双链 DNA 或者以更慢的速度切割含切刻的双链 DNA。该酶切割错配碱基 5´ 端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。 

来源

重组 E. coli 菌株，其携带有麦芽糖结合蛋白（MBP）和 T7 核酸内切酶 I 的编码基因。 

反应条件

1X NEBuffer 2
[50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2 ，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃）]，37℃ 温育。 

质保声明

T7 核酸内切酶 I 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。  

单位定义

1 单位指在 50 μl 反应体系，37℃ 条件下，1 小时将 90% 以上的 1 μg 超螺旋十字型结构的 pUC（AT）* 转化成 90% 以上的线性结构所需要的酶量。单位活性检测条件请联系我们。
www.neb.com 或 www.neb-china.com。
* pUC（AT）来自 pUC19，在其 EcoRI 和 PstI 位点之间的多克隆位点处有修改。 

浓度

10,000 units/ml。 

注意事项

T7 核酸内切酶 I 是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物时，必须控制酶量和反应时间。
反应温度超过 42℃ 时，会增加非特异性核酸酶活性。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

核酸内切酶 IV 货 号 #M0304L-NEB酶试剂

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核酸内切酶 IV                              收藏

核酸内切酶 IV 货 号 #M0304L 核酸内切酶 IV 货 号 #M0304L 核酸内切酶 IV 货 号 #M0304L 核酸内切酶 IV 货 号 #M0304L 核酸内切酶 IV 货 号 #M0304L

货 号
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价 格(元)
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#M0304L
5,000 units
3,359.00
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#M0304S
1,000 units
829.00
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特性

 单细胞凝胶电泳（彗星试验）
 碱洗脱
 碱解旋 

概述

核酸内切酶 IV 能够作用于 DNA 分子上的几种氧化性损伤。该酶是一个脱嘌呤/脱嘧啶（AP）核酸内切酶，水解 DNA 上的完整 AP 位点。切割 AP 位点 5´ 端的第一个磷酸二酯键，产生 3´ 羟基和 5´ 脱氧核糖磷酸末端。该酶也具有 3´ 二酯酶活性，能从 DNA 的 3´ 末端释放磷酸甘油醛、完整的脱氧核糖 5´ -磷酸和磷酸。 

来源

克隆有 Endo IV 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X NEBuffer 3
[100 mM NaCl，50 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活：85℃ 加热 20 分钟。

质保声明

核酸内切酶 IV 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请联系我们。  

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能切割 1 pmol 含一个 AP 位点* 的 34 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量。更多信息请联系我们。 
* AP 位点的创建方法如下：37℃ 条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）处理 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 34 mer 寡核苷酸双链 2 分钟。 

彗星试验的推荐稀释倍数

1:104～1:105。详细步骤见  

浓度

10,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

核酸内切酶 V 货 号 #M0305S-NEB酶试剂

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核酸内切酶 V                              收藏

核酸内切酶 V 货 号 #M0305S 核酸内切酶 V 货 号 #M0305S 核酸内切酶 V 货 号 #M0305S 核酸内切酶 V 货 号 #M0305S 核酸内切酶 V 货 号 #M0305S

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#M0305S
250 units
839.00
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特性

 切割含脱氧次黄嘌呤核苷的寡核苷酸
 切割错配 

概述

核酸内切酶 V 是在 E. coli 中发现的一种 DNA 修复酶。它识别 DNA 中的脱氧次黄嘌呤核苷，即脱氧腺苷的去氨基产物。核酸内切酶 V，也称为脱氧次黄嘌呤核苷 3´ 内切酶，识别含脱氧次黄嘌呤核苷（无论配对与否）的双链或单链 DNA。也可识别含脱碱基（AP）位点或尿素、碱基错配、插入/缺失错配、发夹结构、未配对 loop 环、折叠 flaps 和类 -Y 型结构的 DNA，但是识别后者的能力不如前者。普遍认为核酸内切酶 V 发挥 DNA 修复功能时，还需另外一种蛋白的存在，因为它不能切除 DNA 上的脱氧次黄苷或受损碱基。
 
核酸内切酶 V 对错配脱氧次黄嘌呤核苷 3´ 端第二个磷酸二酯键进行切割，产生一个 3´ 羟基、5´ 磷酸的切刻。 

来源

重组 E. coli 菌株，携带有 Endo V 基因与编码麦芽糖结合蛋白（MBP）基因的融合基因。融合蛋白纯化后具有生物活性。该蛋白含 223 个氨基酸，分子量为 24.9 kDa。 

反应条件

1X NEBuffer 4
[50 mM KAc，20 mM Tris-Ac，10 mM Mg(Ac)2 ，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。 

质保声明

核酸内切酶 V 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。  

单位定义

1 单位指在 10 μl反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内能够切割 1 pmol 含单脱氧次黄嘌呤核苷位点* 的 34 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量。单位活性检测条件请联系我们。

* 脱氧次黄嘌呤核苷位点的制备：合成 34 mer 寡核苷酸双链时，在其一条链的中间掺入脱氧次黄嘌呤核苷（dI）碱基。 

浓度

10,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

T4 PDG 嘧啶二聚体糖基化酶（T4 核酸内切酶 V） 货 号 #M0308S-NEB酶试剂

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

T4 PDG 嘧啶二聚体糖基化酶（T4 核酸内切酶 V）                              收藏

T4 PDG 嘧啶二聚体糖基化酶（T4 核酸内切酶 V） 货 号 #M0308S T4 PDG 嘧啶二聚体糖基化酶（T4 核酸内切酶 V） 货 号 #M0308S T4 PDG 嘧啶二聚体糖基化酶（T4 核酸内切酶 V） 货 号 #M0308S T4 PDG 嘧啶二聚体糖基化酶（T4 核酸内切酶 V） 货 号 #M0308S T4 PDG 嘧啶二聚体糖基化酶（T4 核酸内切酶 V） 货 号 #M0308S

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#M0308S
2,000 units
839.00
无
无
无
无
无

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特性

 DNA 损伤研究
 单细胞凝胶电泳（彗星实验） 

概述

T4 PDG（T4 嘧啶二聚体糖基化酶）既有 DNA 糖基化酶活性，又有 AP 裂解酶活性。16 KD 的蛋白质可识别因紫外线照射引起的 cis-syn 型环丁烷嘧啶二聚体。该酶切割嘧啶二聚体的 5´ 端糖苷键，同时其内切酶活性切割 AP 位点上的磷酸二酯键。 

来源

含有编码 T4 denV 基因质粒的 E. coli 菌株。 

反应条件

1X T4 PDG 反应缓冲液
[25 mM Na2PO4（pH 7.2 @ 25℃），100 mM NaCl，1 mM EDTA，1 mM DTT]。加入 100 μg/ml BSA，37℃ 温育。 

质保声明

T4 嘧啶二聚体糖基化酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。  

单位定义

1 单位指 20 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟内使超过95% 的 0.5 μg 经紫外线照射诱变的超螺旋 pUC19 DNA 变成切刻型质粒的酶量。切刻可通过琼脂糖凝胶电泳来检测。诱变后的质粒 DNA 平均含有 3-5 个嘧啶二聚体。单位活性检测条件请联系我们。  

浓度

10,000 units/ml。 

注意事项

为取得最佳使用效果，建议温育时间不超过 30 分钟。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

切割错配核酸内切酶 I 货 号 #M0678S-NEB酶试剂

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#M0678S
4,000 units
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产品特点

 切割错配核酸内切酶 I 货 号 #M0678S

• DNA 核酸内切酶
• 催化切割一些 DNA 错配（T:T，G:G 和 G:T）
• 在两条链上错配碱基 5’端的第三个磷酸二酯键处切割，切割后产生 5 bp 粘性末端，含 3′-OH 和 5′- 磷酸
• 对于 T 错配切割效果最好；无法识别所有类型的 DNA 错配
 

产品描述

切割错配核酸内切酶 I 是一种依赖 Mg2+ 的 DNA 核酸内切酶，可特异切割错配碱基对（T:T、G:G 和 T:G 错配）。切割错配核酸内切酶 I 在两条链上错配碱基 5’端的第三个磷酸二酯键处切割，切割后产生 5 bp 粘性末端。切割错配核酸内切酶 I 优先切割的 DNA 错配为:T:T、G:G 和 T:G，也可轻松切割 T:I、G:I 和 G:U 错配。此外，实验证明：切割错配核酸内切酶 I 在 T:C 类型的 DNA 错配中可在含 T 的链上形成切刻。该酶还能切割 DNA:RNA 杂交链上的 T:G 和 T:U 错配，但其切割效率低于 DNA:DNA 错配。

 

图 1.切割错配核酸内切酶 I 能够切割双链 DNA 上的 T:T、G:T 和 G:G 错配
切割错配核酸内切酶 I 货 号 #M0678S

（A）构建四个在同一位点包含特定突变质粒（p1-p4），使用差异磷酸化引物（正向或反向）扩增生成 8 个双链 PCR 片段，长度约 672 bp （ds1-ds8）。经 Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒（NEB #T1030）纯化后，使用 5 units Lambda 核酸外切酶，经37℃孵育 60 分钟，以特异性降解双链片段中的磷酸化链（2.2 µg），从而产生一系列单链（正链/负链），同一位点碱基为 A/T/C/G。随后使用 Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒（NEB #T1030）对这些单链片段（ss1-ss8）进行纯化。

（B）将纯化后的含有 A/T/C/G 的单链片段进行混合，可形成精准配对的 DNA（绿色 √ 框）或含单碱基错配的双链片段（黄色 × 框）。为了生含错配碱基的双链，在下述条件下，选择特定的正/反义链进行混合：在 1X NEBuffer 2.1 中重新退火，加热至 95℃，再冷却至室温。上述实验可产生 8 种 DNA 错配（A:A、A:C、A:G、C:C、C:T、G:G、G:T、T:T）。（C）如下方法检测该酶切割 dsDNA 中特定错配的能力：在 200 ng 含错配的 dsDNA 中加入 80 units 切割错配核酸内切酶 I，37℃孵育 30 分钟。后将产物进行琼脂糖（1.2%）凝胶电泳并用溴化乙锭染色观察。

 

图 2.切割错配核酸内切酶 I 能够切割双链 DNA 上的 T:T、G:T 和 G:G 错配 

 

切割错配核酸内切酶 I 货 号 #M0678S

使用前端带有 FAM 荧光标记（蓝色示踪染料），末端带有 ROX 荧光标记（红色示踪染料）的双链 DNA 片段与80 units 切割错配核酸内切酶 I（+M0678）在 NEBuffer r2.1 中，37℃孵育 30 分钟，用于测定切割错配核酸内切酶 I 切割 dsDNA 中特定错配的能力。样品经毛细管电泳分析显示：酶解样品（+M0678 样品）与未经酶处理的样品（-M0678）相比，T:T、G:T 和 G:G 错配的底物峰发生偏移。此外，在 30 分钟内即可看到 T:C 错配中的含 T 链（蓝色链）出现一些轻微切割。该酶在 T:C 错配底物上的切刻活性随着时间的推移而增加（最多 18 小时，本数据未显示）。
 

糖苷内切酶 H 货 号 #P0702L-NEB酶试剂

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糖苷内切酶 H 货 号 #P0702L 糖苷内切酶 H 货 号 #P0702L 糖苷内切酶 H 货 号 #P0702L

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#P0702L
50,000 units
3,229.00
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#P0702S
10,000 units
769.00
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识别位点

糖苷内切酶 H 货 号 #P0702L

Endo H 和 Endo Hf 仅切割高甘露糖型结构（high mannose structures）（n = 2-150，x =(Man)1-2，
y = H）和杂合型结构（hybrid structures）（n = 2，x 和/或 y = AcNeu-Gal-GlcNAc）。

特性

 去除糖蛋白中的 N-连接高甘露糖

概述

糖苷内切酶 H 是一种重组糖苷酶，能够对 N-糖蛋白中的高甘露糖和某些杂合型寡聚糖的壳二糖核心结构进行切割。
 

来源

糖苷内切酶 H 克隆自褶皱链霉菌（Streptomyces plicatus）并在 E. coli 中高度表达。

反应条件

将糖蛋白在 1X 糖蛋白变性缓冲液（含 0.5% SDS，40 mM DTT）中 100℃ 煮沸 10 分钟使其变性，再在
1X GlycoBuffer 3 反应缓冲液中于 37℃ 温育。热失活：65℃ 10 分钟。

随酶提供的试剂

10X 糖蛋白变性缓冲液
10X GlycoBuffer 3 反应缓冲液

分子量

Endo H：29,000 daltons。
 

质量保证

无糖苷外切酶污染，无蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指 10 μl 的反应体系中，37℃ 条件下，1 小时从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95%的碳水化合物所需要的酶量（10 NEB units = 1 IUB milliunit）。

浓度

Endo H 浓度：500,000 units/ml。
 

注意事项

酶活性不受 SDS 影响。

要使天然糖蛋白去糖基化，可能需要增加酶量并延长温育时间。

参考文献

糖苷内切酶 Hf 货 号 #P0703L-NEB酶试剂

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糖苷内切酶 Hf 货 号 #P0703L 糖苷内切酶 Hf 货 号 #P0703L 糖苷内切酶 Hf 货 号 #P0703L

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#P0703L
500,000 units.
3,129.00
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#P0703S
100,000 units
769.00
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有
无
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识别位点

 

糖苷内切酶 Hf 货 号 #P0703L

 

Endo H 和 Endo Hf 仅切割高甘露糖型结构（high mannose structures）（n = 2-150，x =
(Man)1-2，y = H）和杂合型结构（hybrid structures）（n = 2，x 和/或 y = AcNeu-Gal-GlcNAc）。

特性

 去除糖蛋白中的 N-连接高甘露糖

概述

糖苷内切酶 Hf 是糖苷内切酶 H 和麦芽糖结合蛋白组成的融合重组蛋白，具有与糖苷内切酶 H 相同的活性。

来源

糖苷内切酶 Hf 克隆自褶皱链霉菌（Streptomyces plicatus）并在 E. coli 中高度表达。

反应条件

将糖蛋白在 1X 糖蛋白变性缓冲液（含 0.5% SDS，40 mM DTT）中 100℃ 煮沸 10 分钟使其变性，再在
1X GlycoBuffer 3 反应缓冲液中于 37℃ 温育。热失活：65℃ 10 分钟。

随酶提供的试剂

10X 糖蛋白变性缓冲液
10X GlycoBuffer 3 反应缓冲液

分子量

Endo Hf：70,000 daltons。

质量保证

无糖苷外切酶污染，无蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指 10 μl 的反应体系中，37℃ 条件下，1 小时从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95%的碳水化合物所需要的酶量（10 NEB units = 1 IUBmilliunit）。

浓度

Endo Hf 浓度：1,000,000 units/ml。

注意事项

酶活性不受 SDS 影响。

要使天然糖蛋白去糖基化，可能需要增加酶量并延长温育时间。

参考文献

糖苷内切酶 S 货 号 #P0741L-NEB酶试剂

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糖苷内切酶 S 货 号 #P0741L 糖苷内切酶 S 货 号 #P0741L 糖苷内切酶 S 货 号 #P0741L 糖苷内切酶 S 货 号 #P0741L

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#P0741L
30,000 units
9,209.00
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#P0741S
6,000 units
2,319.00
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识别位点

糖苷内切酶 S 货 号 #P0741L

特性

 从野生型 IgG 移除 N-连接糖
 用于检测 N-糖基化位点
 更多详细结构特异性请翻阅 232 页

概述

糖苷内切酶 S 是一种高度特异性糖苷内切酶，可以从野生型 IgG 重链的壳二糖核心结构之间切除 N-连接糖。糖苷内切酶 S 携带有几丁质结合域（CBD）标签，易于从反应中去除。以不含甘油的形式提供，便于在 HPLC 和 MS 分析中取得最佳效果。

来源

糖苷内切酶 S 基因克隆自酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes），与几丁质结合域融合，在 E. coli 中高度表达。

随酶提供的试剂：

10X GlycoBuffer 1 反应缓冲液

分子量

136,000 daltons。

质量保证

无糖苷外切酶污染，无蛋白水解活性。

单位定义

在 1X GlycoBuffer 2 反应缓冲液中，5 μgIgG 与两倍稀释的 Remove-iT 糖苷内切酶 S 37℃ 温育 1 小时。通过 SDS-PAGE 观察反应产物分离。

浓度

200,000 units/ml。

热失活

55℃ 10 分钟。

参考文献

有关该产品特性和应用的相关文献请联系我们。

糖苷内切酶 D 货 号 #P0742L-NEB酶试剂

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糖苷内切酶 D 货 号 #P0742L 糖苷内切酶 D 货 号 #P0742L 糖苷内切酶 D 货 号 #P0742L 糖苷内切酶 D 货 号 #P0742L

货 号
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#P0742L
7,500 units
9,549.00
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无
无
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#P0742S
1,500 units
2,409.00
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识别位点

糖苷内切酶 D 货 号 #P0742L

X=（H 或寡糖）

特性

 从糖蛋白和糖肽链上切除寡甘露糖 N-连接糖链
 适用于 N-糖基化位点的确定

概述

糖苷内切酶 D 又称 Endo D，是重组糖苷内切酶，能够从糖蛋白和糖肽链上切除寡甘露糖 N-连接糖链，无论糖支链有无延伸，切割位点位于壳二糖核心结构之间。
糖苷内切酶 D 携带有几丁质结合域（CBD）标签，易于从反应中去除。以不含甘油的形式提供，便于在 HPLC 和 MS 分析中取得最佳效果。

来源

糖苷内切酶 D 的截短基因克隆自肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）并在 E. coli 中作为融合有几丁质结合域的蛋白高度表达。

随酶提供的试剂：

10X DTT
10X GlycoBuffer 2 反应缓冲液

分子量

140,000 daltons。

质量保证

无糖苷外切酶污染，无蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指 10 μl 的反应体系中，37℃ 条件下，1 小时从 10 μg 经糖苷酶切割后的（具有三个甘露糖核心结构）胎球蛋白中除去超过 95% 的碳水化合物所需要的酶量。

浓度

50,000 units/ml。

热失活

65℃ 10 分钟。

参考文献

有关该产品特性和应用的相关文献请联系我们。

糖苷内切酶 F3 货 号 #P0771S-NEB酶试剂

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糖苷内切酶 F3 货 号 #P0771S 糖苷内切酶 F3 货 号 #P0771S 糖苷内切酶 F3 货 号 #P0771S 糖苷内切酶 F3 货 号 #P0771S

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#P0771S
240units
2,389.00
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识别位点

 糖苷内切酶 F3 货 号 #P0771S

特性

 从糖蛋白和糖肽链上切除复杂二、三支链 N-连接糖原

 用于检测 N-糖基化位点

概述

糖苷内切酶 F3 是一种具有高度特异性的重组糖苷内切酶，能够从糖蛋白和糖肽链上切除与天冬酰胺连接的复杂二、三支链型寡糖链，寡糖链核心结构上可以被岩藻化，切割位点位于壳二糖核心结构之间。糖苷内切酶 F3 携带有几丁质结合域（CBD）标签，易于从反应中去除。以不含甘油的形式提供，便于在 HPLC 和 MS 分析中取得最佳效果。

来源

糖苷内切酶 F3 克隆自和平空间站伊丽莎菌（Elizabethkingia miricola，formerly Flavobacterium

meningosepticum）并在 E. coli 中高度表达。

随酶提供的试剂

 10X GlycoBuffer 4 反应缓冲液

分子量

 38,800 daltons

质量保证

 无糖苷外切酶污染，无蛋白水解活性。

单位定义

 1 单位指 10 μl 的反应体系中，37℃ 条件下，1 小时从 10 μg 猪纤维蛋白原中除去超过95% 的碳水化合物所需要的酶量。

浓度

 8,000 units/ml

热失活

 65℃ 10 分钟。

参考文献

有关该产品特性和应用的相关文献请登陆

糖苷内切酶 F2 货 号 #P0772S-NEB酶试剂

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糖苷内切酶 F2                              收藏

糖苷内切酶 F2 货 号 #P0772S 糖苷内切酶 F2 货 号 #P0772S 糖苷内切酶 F2 货 号 #P0772S 糖苷内切酶 F2 货 号 #P0772S

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#P0772S
480 units
2,619.00
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识别位点

 糖苷内切酶 F2 货 号 #P0772S

特性

 从糖蛋白和糖肽链上切除复杂二支链 N-连接糖原

 

 用于检测 N-糖基化位点

概述

糖苷内切酶 F2 是一种具有高度特异性的重组糖苷内切酶，能够从糖蛋白和糖肽链上切除与天冬酰胺连接的复杂二支链型糖链和高甘露糖链，切割位点位于壳二糖核心结构之间。该酶切割二支链型糖链的速度是切割高甘露糖链的 20倍。核心结构上有无岩藻糖，对切割二支链型糖链的活性无任何影响。但是该酶不能切割杂合型或者有三、四支链糖链。糖苷内切酶 F2 携带有几丁质结合域（CBD）标签，易于从反应中去除。以不含甘油的形式提供，便于在 HPLC 和 MS分析中取得最佳效果。

来源

糖苷内切酶 F2 克隆自和平空间站伊丽莎菌（Elizabethkingia miricola，formerly Flavobacterium
meningosepticum）并在 E. coli 中高度表达。

随酶提供的试剂：

 10X GlycoBuffer 4 反应缓冲液

分子量

 39,800 daltons。

质量保证

 无糖苷外切酶污染，无蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指 10 μl 的反应体系中，37℃ 条件下，1 小时从 10 μg 猪纤维蛋白原中除去超过95% 的碳水化合物所需要的酶量。

浓度

8,000 units/ml。

热失活

 65℃ 10 分钟。

参考文献

有关该产品特性和应用的相关文献请联系我们。

蛋白内切酶 GluC 货 号 #P8100S-NEB酶试剂

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产品资料 – 糖生物学与蛋白质工具 – 蛋白酶

蛋白内切酶 GluC                              收藏

蛋白内切酶 GluC 货 号 #P8100S 蛋白内切酶 GluC 货 号 #P8100S 蛋白内切酶 GluC 货 号 #P8100S

货 号
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#P8100S
50 μg
979.00
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无
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无

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识别位点

蛋白内切酶 GluC 货 号 #P8100S 

特性

 通过质谱进行蛋白质组学分析的理想用酶
 可用于蛋白和多肽的鉴定
 从蛋白酶缺陷型枯草芽孢杆菌中表达，无其它蛋白酶污染

概述

蛋白内切酶 GluC（又称金黄色葡萄菌 V8 蛋白酶）是丝氨酸蛋白酶，能选择性切割谷氨酸羧基端的肽键，同时也能够切割天冬氨酸残基，但其反应速率要比前者慢 100-300 倍。

来源

克隆自金黄色葡萄球菌（Stophylococcus aureus）V8 蛋白酶基因，在枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）中表达。

反应条件

1X GluC 反应缓冲液[50 mM Tris-HCl，0.5 mM Glu-Glu (pH 8.0 @ 25℃)]，37℃ 温育。

随酶提供的试剂

2X GluC 反应缓冲液。

分子量

29,849 daltons。

重溶

用 50-500 μl 的高纯水溶解。快速自裂解效率随酶浓度不同而异。

注意事项

以液态形式于 -20℃ 可贮存 2 周，但液态形式保存会降低其活性。欲达到最佳效果，请使用新鲜重溶的蛋白酶。

参考文献

有关该产品特性和应用的相关文献请联系我们。

蛋白内切酶 AspN 货 号 #P8104S-NEB酶试剂

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蛋白内切酶 AspN                              收藏

蛋白内切酶 AspN 货 号 #P8104S 蛋白内切酶 AspN 货 号 #P8104S 蛋白内切酶 AspN 货 号 #P8104S

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
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广州库存
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#P8104S
50 μg
969.00
有
无
有
无
无

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识别位点

 蛋白内切酶 AspN 货 号 #P8104S

特性

 通过质谱进行蛋白质组学分析的理想用酶
 无蛋白酶污染
 最适用于多肽的鉴定

概述

蛋白内切酶 AspN（flavastacin）是锌金属内切肽酶，能选择性切割天冬氨酸残基的 N-端肽键。

来源

纯化自脑膜脓毒性黄杆菌（Flavobacterium menigosepticum）。

反应条件

1X AspN 反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 37℃)，2.5 mM ZnSO4]，37℃ 温育。

随酶提供的试剂

2X AspN 反应缓冲液。

分子量

40,089.9 daltons。

质量保证

蛋白内切酶AspN不含甘油和去污剂，因此避免了这些物质对基质辅助激光解吸/离子飞行时间质谱（MALDI-TOF）、电喷雾电离（ESI）质谱（MS）或液相色谱（LC）可能产生的干扰。

重溶

蛋白内切酶 AspN 应使用 50-500 μl 的高纯水溶解，快速自裂解效率随酶浓度不同而异。

注意事项

以液态形式于 -20℃ 可贮存 2 周，但液态形式保存会降低活性。为达到最佳效果，请使用新鲜重溶的蛋白酶。

参考文献

有关该产品特性和应用的相关文献请联系我们。

蛋白内切酶 LysC 货 号 #P8109S-NEB酶试剂

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产品资料 – 糖生物学与蛋白质工具 – 蛋白酶&蛋白质组分析

蛋白内切酶 LysC                              收藏

蛋白内切酶 LysC 货 号 #P8109S

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#P8109S
20 μg
2,009.00
无
无
无
无
无

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识别位点

 蛋白内切酶 LysC 货 号 #P8109S

特性

通过质谱进行蛋白质组学分析的理想用酶

无蛋白酶污染
最适用于多肽的鉴定

概述

蛋白内切酶 LysC（flavastacin）是丝氨酸蛋白内切酶，克隆自产酶溶杆菌，能特异性切割赖氨酸羧基端的肽键。该酶是测序级酶适用于蛋白质组学和糖生物学应用。
 
注意：在 200 μl 双蒸水中重溶 LysC，制成 100 ng/μl 含10 mM Tris-HCl, pH 8.0 的溶液。溶液可以在 4℃ 储存几天，或者分装成一次性使用量于 -20℃ 储存几个月。

来源

提纯自产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）。

分子量

30,000 daltons。

重溶

蛋白内切酶 LysC 需溶解于 200 μl 双蒸水中制成 100 ng/μl 含10 mM Tris-HCl, pH 8.0 的溶液。快速自裂解效率随酶浓度不同而异。

参考文献

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